[发明专利]针对DD3基因的小干扰RNA及其表达载体构建与应用

说明书

技术领域

本发明涉及小干扰RNA技术，特别涉及一种针对DD3基因的小干扰RNA及其表达载体构建与应用。具体地说，涉及一种抗前列腺癌的小干扰RNADD3基因序列及重组慢病毒表达载体，提供了一种重组慢病毒表达载体介导的抗前列腺癌DD3小干扰RNA基因，具有靶向性抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及动物瘤体的生长，从而达到抑制前列腺癌的发展与转移的作用。

背景技术

前列腺癌(carcinoma of prostate)已成为美国男性最常见的肿瘤。在美国男性肿瘤中的致死率中排第二位，仅次于肺癌。在欧盟排第三，次于肺癌和大肠癌。在我国，随着社会人口的老龄化出现，前列腺癌的发病率也逐年增高。因此，对前列腺癌分子发病机制及前列腺癌诊治新技术、新疗法的研究尤为重要和迫切。

长链非编码RNA(long non-coding RNA，LncRNA)，是指那些由DNA转录却并不翻译成蛋白的RNA，近来还有研究发现，在一些肿瘤组织中，LncRNA有着过表达或者低表达的现象。提示在肿瘤的发生发展过程中，它们可能发挥着重要的作用。细胞增殖、分化以及凋亡的异常导致肿瘤的发生，而LncRNA作为一个重要调控单位，参与调控相关基因的表达，它们的异常表达有可能引起这些现象的发生。

DD3(differential display code 3)是一种长链非编码RNA(>NR_015342.1)，又称为前列腺癌基因3(prostate cancer gene 3，PCA3)，是近年来发现的前列腺癌高度特异性基因，是一个临床潜力很高的前列腺癌标志物。DD3基因仅在前列腺上皮细胞中表达，具有较高的肿瘤特异性。DD3基因定位于9q21–22染色体上，含有4个外显子和3个内含子。目前国外更多研究表明DD3基因的特异性区域位于外显子4中。前列腺癌患者外周血中的DD3基因表达水平较正常对照组升高约34倍。前列腺腺上皮细胞产生的分泌物、脱落的前列腺腺上皮细胞经过导管排泄到尿道，前列腺癌细胞同样可以排到尿道内并且可以检测出来，前列腺按摩后尿液标本可以检测到DD3的高表达。而尿液沉淀物能够包含所有细胞和细胞碎片，更能准确检测DD3的表达。DD3可作为一种潜在的前列腺癌标志物应用到诊断中，甚至在不久的将来有可能会应用到前列腺癌的治疗中。

小干扰RNA(small interference RNA，siRNA)是生物体内抑制特定基因表达的一种现象，它是指当细胞内存在与内源性mRNA编码区内同源的双链RNA时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默的现象。由于siRNA能抑制特定基因的表达，应用siRNA进行基因治疗有非常广阔的临床应用前景。目前，各大生物技术公司都在积极开发这类药物，并即将进入临床试验阶段。原癌基因是细胞基因组中的正常组成成分，当受到多种因素的作用使其发生变异时，激活成为癌基因，癌基因与细胞异常增殖及癌的发生有关。可以应用siRNA技术来抑制癌基因的mRNA，从而抑制肿瘤生长，同时，还可通过siRNA技术促进癌细胞凋亡、调控细胞周期以及抑制血管生成等方面来治疗癌症。尽管RNAi技术作为肿瘤基因治疗的新型工具仍然存在着许多急待解决的问题，如怎样提高肿瘤细胞的靶向性等等。但随着科学工作者对RNAi研究的不断深入，siRNA技术将会成为一种非常有前景的肿瘤治疗手段。

慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

因此，如果能利用RNAi技术，涉及特异性针对DD3基因的siRNA，彻底研究清楚DD3和前列腺癌转移的组织间的关系，将会为前列腺癌癌相关的癌症的治疗提供一种有益的途径。因此，本发明的技术目的在于利用RNAi技术研究清楚DD3与前列腺癌的关系。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种针对DD3基因的siRNA。本发明通过大量筛选和实验工作得到针对DD3基因的siRNA。

本发明的另一目的在于提供所述的针对DD3基因的siRNA的编码基因。

本发明的另一目的在于提供一种载有针对DD3基因的siRNA重组表达载体。