[发明专利]一种高效分泌表达短小芽孢杆菌漆酶的方法

权利要求书

1.一种高效分泌表达短小芽孢杆菌漆酶的基因工程菌，其特征在于，是将短小芽孢杆菌漆酶基因cotA以pMA0911为表达载体，以枯草芽孢杆菌为宿主构建得到的基因工程菌，所述枯草芽孢杆菌是枯草芽孢杆菌WB400、WB600或WB800中的一种。

2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述漆酶基因cotA的序列如SEQ IDNO.1所示。

3.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌是B.subtilisWB600。

4.一种构建权利要求1-3任一所述基因工程菌的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：(1)PCR扩增或化学合成cotA基因序列，(2)将cotA基因与表达质粒pMA0911连接，构建重组质粒pMA0911-CotA；(3)将pMA0911-CotA转化枯草芽孢杆菌，筛选验证获得阳性转化子。

5.权利要求1-3任一所述基因工程菌在分泌生产漆酶中的应用方法。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：将重组菌用种子培养基活化后，以5-8％接种量菌液转入装液量50％-60％的发酵罐中，通气量0.8-1.0vvm，搅拌转速300-400r/min，pH不作控制，37℃培养；发酵培养基成分为玉米淀粉12-24g/L，蛋白胨8-12g/L，酵母抽提物9-15g/L，硫酸铜0.1mM。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，将重组菌用种子培养基活化后，以5％接种量菌液转入装液量1.6L的3L发酵罐中，通气量1.0vvm，搅拌转速400r/min，pH不作控制，37℃培养；发酵培养基成分为玉米淀粉18g/L，蛋白胨10g/L，酵母抽提物12g/L，硫酸铜0.1mM。

8.一种高效分泌表达短小芽孢杆菌漆酶的方法，其特征在于，以重组表达了短小芽孢杆菌来源的漆酶基因的枯草芽孢杆菌为生产菌株，发酵生产漆酶。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，将cotA基因与表达质粒pMA0911连接，构建重组质粒pMA0911-CotA，然后转化枯草芽孢杆菌表达菌株WB600，获得重组菌；发酵培养基成分为玉米淀粉12-24g/L，蛋白胨8-12g/L，酵母抽提物9-15g/L，硫酸铜0.1mM；于37℃通风发酵。