[发明专利]一种流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物快速繁殖方法，特别是一种流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法。

背景技术

石斛为兰科植物金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.、铁皮石斛Dendrobium candidum Wall.ex Lindl.或马鞭石斛Dendrobium fimbriatum Hook.var.oculatum Hook.及其近似种的新鲜或干燥茎。在我国传统医学中，石斛为常用珍贵药材，始载于《神农本草经》，列为上品。

流苏石斛(Dendrobium fimbriatum Hook.var.oculatum Hook.)系兰科石斛属植物，茎粗壮，斜立或下垂，质地硬，圆柱形或有时基部上方稍呈纺锤形，叶二列，革质，长圆形或长圆状披针形，总状花序长5～15厘米，疏生6～12朵花，花金黄色，质地薄，开展，稍具香气，花期4～6月，产广西南部至西北部(天峨、凌云、田林、龙州、天等、隆林、东兰、武鸣、靖西、南丹)、贵州南部至西南部(罗甸、兴义、独山)、云南东南部至西南部(西畴、蒙自、石屏、富民、思茅、勐海、沧源、镇康)，海拔600～1700米，生于密林中树干上或山谷阴湿岩石上，分布于印度、尼泊尔、锡金、不丹、缅甸、泰国、越南。《中国药典》称马鞭石斛，具有益胃生津，生津止渴。用于阴伤津亏，口干烦渴，食少干呕，病后虚热，目暗不明。现代研究表明，流苏石斛中发现的毛兰素、毛兰菲、鼓槌菲等化学成分具有抗肿瘤作用。

由于兰科植物种子在野外很难发芽，自然繁殖主要是靠分株繁殖，繁殖率地下，自然更新困难，随着社会的发展，人民对美的追求以及长期以来药用的需求，造成野生资源的严重破坏，现野外已经很少能见到美丽的流苏石斛。

发明内容

本发明的目的是提供一种流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法，直接取流苏石斛的种子进行组织培养，有效缩短流苏石斛的培养周期，减小因多次继代培养造成的变异概率，采用组织培养所得的流苏石斛组培苗，植株健壮，生长能力强，适于工厂化生产，以解决流苏石斛人工种植的种苗问题。

本发明提供的技术方案是：

一种流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法，取流苏石斛种子作为材料进行离体诱导培养，获取流苏石斛的组织培养苗。

优选的是，所述的流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法中，包括以下步骤：

步骤一、将预处理的流苏石斛种子播种于诱导培养基上，培养7-15天，得到流苏石斛小芽，其中，所述诱导培养基为：以MS-H为基本培养基，加入0.5-3.0mg/L吲哚乙酸、1.0-5.0mg/L萘乙酸、0.1-1.0mg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂，并调整诱导培养基的pH值为5.6-6.0；

步骤二、将流苏石斛小芽置于继代培养基中，培养30-40天，获得流苏石斛组培分化苗，其中，所述继代培养基为：以MS为基本培养基，加入0.2.0-2.0mg/L激动素、2.0-4.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、1.0-4.0mg/L萘乙酸、0.5-3.0mg/L吲哚丙酸、0.1-2.0mg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值为5.6-6.0；

步骤三、将流苏石斛组培分化苗移栽至生根培养基中，培养30-40天后，转移至自然光下照射培养40-50天，获得流苏石斛生根组培苗；其中，所述生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入5-20％香蕉，0.1-4.0mg/L萘乙酸、2.0-4.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭，并调整生根培养基的pH值为5.8-6.2；

步骤四、将流苏石斛生根组培苗移栽至苗床上，待流苏石斛小苗生长稳定，即可移栽至大棚。

优选的是，所述的流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法中，步骤一所述流苏石斛种子的预处理为，先将流苏石斛硕果用80-85％乙醇溶液浸泡20-40秒，升汞消毒10-20分钟，清洗干净后切开流苏石斛的硕果，得到预处理的流苏石斛种子。

优选的是，所述的流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法中，步骤四所述的苗床基质为：20-30树皮、10-20杂木、20-30蛭石及10-15珍珠岩。

优选的是，所述的流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法中，步骤四中将流苏石斛生根组培苗移栽至苗床之前，先将流苏石斛生根组培苗根部的培养基清洗干净，晾干水汽，在移栽至苗床上。