[发明专利]一种HIV-1大量感染复制的单核巨噬细胞模型的构建方法有效
| 申请号： | 201410653443.0 | 申请日： | 2014-11-18 |
| 公开（公告）号： | CN104388387A | 公开（公告）日： | 2015-03-04 |
| 发明（设计）人： | 靳昌忠;吴南屏 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N5/0786 | 分类号： | C12N5/0786;C12N15/85 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 邱启旺 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 hiv 大量 感染 复制 单核 巨噬细胞 模型 构建 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种HIV-1大量感染复制的单核巨噬细胞模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）针对SAMHD1基因的CDS1选取作用靶点，并设计1对识别序列L/R，L的序列如SEQ ID NO.11所示，R的序列如SEQ ID NO.12所示；
（2）将靶点识别单元模块的基因片段分别按照L/R序列进行串联，串联成功后克隆入pCAG-T7-TALEN(Sangamo)- Destination质粒，共构建一对TALEN表达质粒对；其中，靶点识别单元模块的基因片段按照L序列进行串联后对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示；按照R序列进行串联后对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示；
（3）通过电转染法将步骤2得到的TALEN质粒对转染到对数生长期的单核巨噬细胞系THP-1细胞内；
（4）转染48小时后，将THP-1细胞在含有浓度为100ug/ml新霉素的1640培养基中培养10-14天；筛选出活细胞，用有限稀释法对每个活细胞进行克隆化培养，得到单细胞克隆的细胞群；
（5）对上述细胞群进行基因测序，挑选出SAMHD1基因靶位点移码突变的细胞，即为HIV-1大量感染复制的单核巨噬细胞。
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