[发明专利]一种拯救流感病毒的方法

说明书

技术领域

本发明涉及病毒疫苗生产领域中一种拯救流感病毒的方法，特别涉及在鸡胚中具有高繁殖力的流感病毒疫苗株的制备方法。

背景技术

H9N2亚型禽流感病毒是一种低致病性禽流感病毒，主要感染鸡、鸭、鹅、候鸟等禽类，但可造成蛋鸡的产蛋量严重下降，肉鸡和青年鸡的复合型呼吸道疾病和死淘率升高，造成严重的经济损失，目前H9N2亚型禽流感病毒已经成为流行于我国鸡群中的主要流感病毒亚型。值得注意的是，H9N2亚型禽流感病毒不仅可以感染禽类，而且无需经过中间宿主即可突破种间屏障感染哺乳动物和人，自1998年全球首次发现人感染H9N2亚型禽流感病毒病例后，人感染H9N2亚型禽流感病毒病例时有发生，凸显出其公共卫生学意义。因此，对禽流感病毒进行连续的分子病毒学监测，分析禽流感病毒变异规律，筛选出合适的疫苗株，研制出高效、安全、工艺简单、价格低廉的禽流感病毒疫苗是急需的。

全病毒灭活苗是人们主要使用的禽流感疫苗，多用鸡胚制备而成。因此，一个理想的疫苗株首先应该在鸡胚中生长良好而且安全，然而，绝大多数流感病毒自然株对鸡胚有致病性，而且病毒的生长滴度也较低，这为大批量生产禽流感疫苗带来了诸多不便。为了克服这一缺点，目前多用遗传重组方法制备高繁殖力的预备疫苗株。

H9N2亚型禽流感病毒为A型流感病毒，A型流感病毒的基因组为单股负链、分节段的RNA，共有8个独立的RNA片段组成，编码10种蛋白质。片段1-3编码RNA依赖的RNA聚合酶，片段1编码聚合酶亚基PB2，片段2编码聚合酶亚基PB1，片段3编码聚合酶亚基PA；片段4编码血凝素HA，是一种与病毒附着感染有关的表面糖蛋白；片段5编码核蛋白NP，是病毒RNA的主要结构部分；片段6编码神经氨酸酶NA，是一种包膜糖蛋白；片段7编码两种基质蛋白M1和M2，是非糖基化的结构蛋白；片段8编码两种非结构蛋白NS1和NS2。血凝素HA和神经氨酸酶NA经常发生抗原漂移和转换，是导致流感暴发的主要原因。

人H1N1流感病毒A/PR/8/34(简称PR8)是一株鸡胚适应病毒株，能在鸡胚中有效地复制。因此，疫苗研制中常常将PR8的6个内部基因与流行毒株的HA和NA基因重组(6+2模式)构建8质粒拯救系统，将重组病毒作为疫苗株来提高病毒滴度。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何制备出在鸡胚中繁殖力高于传统6+2模式得到的重组病毒毒株。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了8+7模式拯救流感病毒的方法，该方法将流感病毒鸡胚适应株的7个基因片段(HA除外)与待拯救流感病毒毒株的8个基因片段共转染包装细胞，使除待拯救流感病毒毒株的编码HA的RNA片段外的14个RNA片段自由组合，进行病毒拯救，得到重组流感病毒。

本发明所提供的拯救流感病毒的方法(也就是构建重组流感病毒的方法)，包括以下步骤：