[发明专利]分离DNJ及制备DNJ纳米混悬剂的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物化学领域，涉及药物分离纯化技术，特别涉及从桑源规模化分离纯化DNJ以及制备DNJ组分纳米混悬剂的方法。

背景技术

糖尿病已成为危害人类的健康的主要杀手之一，可引发眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害及功能障碍。据估计，到2050年，世界上患糖尿病的人数将达到3亿，其中90％为2型糖尿病。目前针对2型糖尿病的口服降糖药主要有磺酰脲类、双胍类、α-葡萄糖苷酶抑制剂和噻唑烷二酮类4类。其中α-葡萄糖苷酶抑制剂降血糖效果显著，受到的关注最为广泛。目前已经上市的阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇属于此类药物，但这几种药物都通过化学合成方法得到，容易引发不同程度的胀气、腹部不适、恶心、呕吐、肠鸣及腹泻等副反应。因此，探索开发高效低毒植物源α-葡萄糖苷酶抑制剂类降血糖药物是中药研究领域的重要发展目标。

DNJ(中文名1-脱氧野尻霉素)是一种哌啶生物碱，广泛存在与桑树的枝干、树叶及根茎中，其结构与葡萄糖相似(结构式如下图所示)，可以与哺乳动物的小肠内的α-葡萄糖苷酶结合，且亲和力明显大于麦芽糖、蔗糖等二糖，从而阻断了二糖与α-葡萄糖苷酶结合，竞争性的抑制了二糖分解为葡萄糖，最终达到控制血糖含量的目的。

目前，受DNJ本身理化性质的限制，现有的分离技术或操作简单效率低、或技术复杂规模小，限制了天然DNJ的实用化和规模化开发，致使DNJ的市场投入量远远小于实际需求量(相关内容可以参考作者对近年来国内外有关植物DNJ的分离纯化研究中各方法的优劣所作系统化总结和讨论(植物源DNJ分离纯化技术综述，蚕业科学，2014，40(3):0544－0550))。鉴于DNJ优异的降血糖性能及其在大规模推广应用所遇到的困境，有必要开发一种简单高效提纯天然DNJ的方法。

药物通过血液或体液扩散转运，首先要具有一定的水溶性，但药物要通过脂质性的生物膜到达各组织细胞，还要求其有适当的脂溶性。DNJ属于水溶性好脂溶性差的物质，因难以通过生物膜到达小肠而不适于生理注射用药。若口服则小肠生理上段的α-葡萄糖苷酶易被抑制，中、下段糖类消化的受影响程度较小，需要通过一定的方法增强其与体内黏膜组织的粘附性，从而延长DNJ在体内的滞留时间，提高其生物利用度。

发明内容

有鉴于此，本发明首先提供一种简单高效的从天然植物中分离提纯DNJ的方法。在此基础上，本发明还提供一种制备DNJ纳米混悬剂的方法。

一种分离DNJ的方法，包括以下步骤：

1)、干燥粉碎桑材料并用稀盐酸、乙醇溶液或沸水提取得到提取液；

2)、首先将步骤1)的提取液浓缩后微波焦化，得到粉状提取物，然后将其溶解并离心分离上层清液，最后浓缩上清液，得到分离物I；

3)、初次色谱分离，包括：

A、利用色谱柱i分离分离物I，本步骤固定相为细沙与活性炭混合物，流动相为乙醇溶液；

B、浓缩A所得洗脱液并用色谱柱ii进一步分离，本步骤固定相为硅胶，流动相为乙酸乙酯、乙醇的混合液；

C、浓缩B所得洗脱液，得到分离物II；

4)、离子交换层析：首先使分离物II通过阳离子交换树脂，并用氢氧化钙溶液进行洗脱，然后浓缩离子交换所得洗脱液，接着向浓缩后的洗脱液中加入乙醇进行沉淀，最后过滤浓缩得到分离物III；

5)、首先利用色谱柱iii分离分离物III，本步骤固定相为氧化铝，流动相为乙酸乙酯、乙醇混合液，然后浓缩洗脱液得到分离物IV；

6)、首先将分离物IV加入乙醇溶液结晶，然后将结晶产物加入乙酸乙酯、乙醇混合溶液中重结晶，最后分离结晶产物即得到分离目标组分。

优选的，步骤1)使用稀盐酸提取时盐酸浓度为0.03～0.07mo l/L；使用乙醇溶液提取时乙醇浓度为60～80％，液料比为20～45mL/g，提取次数为3～5次，提取时利用350～490W超声波辅助处理20～40min；使用沸水提取时沸水温度为95～100℃，液料比为20～45mL/g，提取时间20～40min。

优选的，步骤2)微波焦化时微波功率为640～800W，处理时间为2～6min。

优选的，步骤3)-A中细沙与活性炭体积比为2:1，乙醇溶液浓度为50～90％，洗脱流速为0.9～1.6BV/h，收集1～30柱体积洗脱液；步骤3)-B中乙酸乙酯与乙醇体积比为1:3～2:1，洗脱流速为0.5～1.3BV/h，收集1～30柱体积洗脱液。