[发明专利]一种土霉素的制备方法

权利要求书

1.一种土霉素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.种子培养

1)菌种制备

将龟裂链霉菌孢子接种到含有孢子培养基的母斜面上并在34±0.5℃下培养3.5～4天；然后再接种到含有孢子培养基的子斜面上，在35.5±1℃下培养3～5天，至孢子成熟；

所述孢子培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：麸皮5.5±1％，MgSO₄0.005±0.001％，KH₂PO₄0.01±0.002％，(NH₄)₂HPO₄0.015±0.005％，琼脂粉2.0～2.2％，余量为水；

2)种子罐培养

将制备的孢子转至种子罐培养，首先进行一级种子罐培养，培养条件为：培养温度30～33℃，通气量1:1.5～2.0v/v/min，罐压0.01～0.04MPa，搅拌速度150～230rpm/min，培养时间15～40小时；然后按一级种子罐培养液与二级种子罐培养基体积比为1:2的比例，将一级种子罐培养液转入二级种子罐继续培养，培养条件为：培养温度30～33℃，通气量1:1.5～2.0v/v/min，罐压0.01～0.04MPa，搅拌速度150～230rpm/min，培养时间10～40小时；

所述一级种子罐培养的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉0～3％，花生饼粉0～1.5％，黄豆饼粉0～1.5％，酵母粉0～1％，玉米浆0～1.5％，碳酸钙0～0.6％，硫酸铵0～1％，氯化钠0～0.6％，磷酸二氢钾0～0.03％，植物油0～0.6％，小麦粉0～1.0％，麦芽糊精0～2.0％，氯化钴0～0.005％，消泡剂0～0.1％，余量为水；

所述二级种子罐培养的培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉0～6％，花生饼粉0～2.0％，黄豆饼粉0～2.0％，酵母粉0～1％，玉米浆0～1.5％，碳酸钙0～0.9％，硫酸铵0～1％，氯化钠0～0.5％，磷酸二氢钾0～0.03％，植物油0～0.5％，小麦粉0～1.0％，麦芽糊精0～1.5％，消泡剂0～0.1％，余量为水；

b.发酵培养

种子罐培养完毕后转为发酵培养，发酵培养条件为：罐内温度28～33℃，通气速率为1：0.8～1:1.0v/v/min，罐压0.02～0.05MPa，搅拌速度150～230rpm/min，pH值5.2～6.6，发酵时间130～250小时；发酵过程中通过添加补料培养基控制发酵液总糖质量百分浓度在3～5％之间；发酵结束前，依据发酵液总糖浓度来确定添加补料量，确保发酵结束时发酵液总糖质量百分浓度不高于3％；

发酵培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉0～9.0％，花生饼粉0～2.0％，黄豆饼粉0～2.0％，酵母粉0.4～1.0％，玉米浆0～2.5％，碳酸钙0～0.9％，硫酸铵0～1.2％，氯化钠0～0.3％，磷酸二氢钾0～0.03％，淀粉酶0～0.07％，植物油0～0.4％，消泡剂0～0.1％，余量为水；

补料培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：玉米淀粉0～50％，花生饼粉0～0.5％，黄豆饼粉0～0.5％，酵母粉0～0.5％，玉米浆0～3％，碳酸钙0～0.9％，硫酸铵0～0.9％，氯化钠0～0.5％，淀粉酶0～0.2％，消泡剂0～0.3％，余量为水；

c.发酵液的分离纯化

发酵培养结束后，首先对发酵液进行预处理，然后板框过滤；过滤后的滤液用122离子交换树脂进行脱色，直至滤液透光度≥90％后进入结晶罐结晶；在结晶罐内温度为8～10℃条件下，用氨水将脱色后滤液pH值调至4.4～4.8，然后保温50～60min，再进行离心分离，直至分离后湿晶体含水量按质量百分浓度计达19～20％；将离心得到的湿晶体采用气流干燥方式进行干燥，保持进风温度为100～160℃，最后得到含水量按质量百分浓度计≤10％的干粉。

2.根据权利要求1所述的一种土霉素的制备方法，其特征在于，所述孢子培养基按质量百分浓度计由以下成分组成：麸皮5.5％，MgSO₄0.004％，KH₂PO₄0.01％，(NH₄)₂HPO₄0.015％，琼脂粉2.0％，余量为水。