[发明专利]可溶性I型鸭肝炎病毒3D蛋白在制备ELISA试剂中的应用及其ELISA试剂盒

权利要求书

1.可溶性I型鸭肝炎病毒3D蛋白在制备检测I型鸭病毒性肝炎抗体的ELISA试剂中的应用，其特征在于，所述可溶性蛋白的制备步骤如下：将SEQ ID NO.3所示序列的第9～1376位核苷酸连接于pET-32(a)+载体的多克隆酶切位点处，然后以大肠杆菌Rosetta、BL21或BL21(DE3)PLYS为宿主菌，在Amp抗性的LB培养基中活化后，在IPTG终浓度为0.2～1.0mmol/L、温度为20～39℃条件下诱导表达4～12小时，收集菌液，离心后收集菌体，将收集的菌体用20mmol/L、pH为8.0的Tris-HCl悬浮，然后在冰浴下超声，破碎后进行离心，上清用Ni²⁺-NTA琼脂糖凝胶柱纯化，透析，超滤得可溶性I型鸭肝炎病毒3D蛋白。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述宿主菌为大肠杆菌BL21(DE3)PLYS。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述诱导表达为加入IPTG至终浓度为0.8mmol/L，在温度为25℃条件下诱导表达6小时。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述活化的具体步骤为：将表达菌株接种于Amp抗性的LB培养基中，在37℃、120r/min条件下过夜培养，然后将培养液与Amp抗性的LB培养基按体积比为1：100扩大培养至OD₆₀₀为0.6即可。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述冰浴下超声为在冰浴条件下超声破碎6次，30sec/次，每次间隔30sec。

6.检测I型鸭病毒性肝炎抗体的ELISA试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有可溶性I型鸭肝炎病毒3D蛋白包被的反应板。

7.根据权利要求6所述的ELISA试剂盒，其特征在于：所述反应板的制备方法为将1μg/mL的可溶性I型鸭肝炎病毒3D蛋白按每孔100μL加入反应板中，4℃过夜包被，次日PBST洗板5次，拍干即可。

8.根据权利要求6所述的ELISA试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还含有酶标抗体、显色液和终止液。

9.根据权利要求6所述的ELISA试剂盒，其特征在于：所述酶标抗体为HRP标记羊抗鸭IgG或HRP标记兔抗鸭IgG，所述显色液为TMB，所述终止液为浓度为2mol/L的H₂SO₄。