[发明专利]犬新孢子虫的分离方法和体外培养方法

权利要求书

1.一种犬新孢子虫的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

取一定体积浓度为10kU/ml的青霉素和10mg/ml的链霉素的双抗，应用一次性注射器无菌采集犬新孢子虫感染的动物脑组织，该犬新孢子虫感染的动物脑组织体积为该双抗体积的两倍以上，将该双抗加入到采集的该犬新孢子虫感染的动物脑组织；

采用不同规格的一次性注射器按照针头直径缩小的顺序反复吸吹。

2.根据权利要求1所述的犬新孢子虫的分离方法，其特征在于，所述吸吹步骤中，反复吸吹至少10次以上。

3.根据权利要求1所述的犬新孢子虫的分离方法，其特征在于，所述一次性注射器，针头直径的大小不小于27G。

4.根据权利要求1所述的犬新孢子虫的分离方法，其特征在于，所述一次性注射器，选自12G针头、20G针头、27G针头中任意一种以上的针头。

5.根据权利要求1所述的犬新孢子虫的分离方法，其特征在于，还包括：将经过处理的所述犬新孢子虫感染动物脑组织接种到对数生长期的Vero细胞中培养。

6.根据权利要求5所述的犬新孢子虫的分离方法，其特征在于，所述培养采用DMEM完全培养液。

7.根据权利要求6所述的犬新孢子虫的分离方法，其特征在于，所述培养液含有1％双抗和8％犊牛血清。

8.根据权利要求6或7中所述的犬新孢子虫的分离方法，其特征在于，所述培养液每隔24小时更换一次。

9.一种犬新孢子虫的体外培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

采用含8％犊牛血清的DMEM培养液培养原代人胚肾细胞-293细胞；

当原代人胚肾细胞-293细胞长成单层细胞后，向每瓶原代人胚肾细胞-293细胞中接种10³个根据权利要求1-8中任意一项所述的分离方法得到的犬新孢子虫速殖子，每隔12小时更换培养液；以及

采用倒置显微镜观察犬新孢子虫速殖子增殖情况。