[发明专利]试剂盒及其应用以及联合检测多种氨基酸和肉毒碱的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种串联质谱检测用试剂盒及其应用以及联合检测多种氨基酸和肉毒碱的方法。

背景技术

遗传性代谢病是一类涉及氨基酸、有机酸、脂肪酸、尿素循环、碳水化合物、类固醇等多种物质代谢的疾病。其种类繁多，是儿科临床的疑难杂症。虽然其单一病种患病率较低，但总体发病率较高，对人口素质、家庭乃至社会的发展构成了极大的威胁。其诊断主要依赖实验室的特异性检查。

我国每年出生约2200万新生儿，其中出生缺陷儿占90万，占世界的20％，平均每30秒出生一名出生缺陷儿，带给家庭的是沉重的经济、精神压力及终身的痛苦；不利于和谐社会建设和医疗体制改革。仅高苯丙氨酸血症(包括苯丙酮尿症)这类疾病，每年就新增患儿1600-1800例。液相串联质谱技术的发展使得这类疾病在发病前进行干预成为可能。即在新生儿出生后体内某些代谢产物出现异常，而尚未出现临床症状或者症状不明显时就早期明确诊断，并进行及时而有效的对症治疗，以避免患儿的重要脏器出现不可逆性损害，进而保障儿童正常的体格发育和智能发育。

串联质谱检测氨基酸和肉碱的原理：用于分析的样品分子(或原子)在离子源中离化成具有不同质量的带电荷分子离子和碎片离子，这些带电荷离子在加速电场中获得相同的动能并形成一束离子进入质量分析器中(可由电场和/或磁场组成)，根据质荷比不同按空间位置、时间先后或运动迹的稳定与否等实现分离，记录各种检测到的离子的质量数和丰度，形成质谱图。通过质谱分析，我们可以获得分析样品的分子量、分子式、分子中同位素构成和分子结构等多方面的信息。基于以上理论，通过特定的技术将样本中的物质提取出来，利用合适的流动液体带入串联质谱系统，根据物质的质荷比不同就能测定不同成分的浓度。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供了一种新的用于串联质谱检测的试剂盒及其应用，以及利用本发明的试剂盒联合检测多种氨基酸和肉毒碱的方法。

为了实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种串联质谱非衍生法检测用试剂盒，该试剂盒包括：同位素标准品、提取液和流动相，其中，所述提取液为甲醇浓度为85-99体积％的甲醇水溶液，所述流动相为甲醇、水、乙腈、甲酸和七氟丁酸中的至少三种组成的混合液。

第二方面，本发明提供了一种使用第一方面所述的试剂盒联合检测多种氨基酸和肉毒碱的方法，该方法包括：(1)使用同位素标准品和提取液制备工作溶液；(2)打孔加样；(3)样本提取；(4)上机检测。

第三方面，本发明提供了一种串联质谱衍生法检测用试剂盒，该试剂盒包括：同位素标准品、提取液、衍生化溶液和流动相，其中，所述提取液为甲醇浓度为85-99体积％的甲醇水溶液，所述流动相为甲醇、水、乙腈、甲酸和七氟丁酸中的至少三种组成的混合液。

第四方面，本发明提供了一种使用第三方面所述的试剂盒联合检测多种氨基酸和肉毒碱的方法，该方法包括：(1)使用同位素标准品和提取液制备工作溶液；(2)打孔加样；(3)样本提取；(4)干燥后加入衍生试剂进行转化；(5)干燥后加入作为复溶液的流动相，振荡混匀；(6)上机检测。

第五方面，本发明提供了第一方面和/或第三方面所述的试剂盒在检测氨基酸和/或肉毒碱中的应用。

本发明的试剂盒用于串联质谱检测时比传统方法能达到更高的精密度和准确度高，利用外周血制成的干血滤纸片标本，只需3微升血液样本即可一次性定量10余种氨基酸和30余种肉碱，根据这些指标能筛选40余种先天性遗传代谢性疾病，大大提高了对疾病的筛查和诊断效率。

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

本发明提供的串联质谱非衍生法检测用试剂盒包括：同位素标准品、提取液和流动相，其特征在于，所述提取液为甲醇浓度为85-99体积％的甲醇水溶液，所述流动相为甲醇、水、乙腈、甲酸和七氟丁酸中的至少三种组成的混合液。

本发明中，所述同位素标准品包括氨基酸同位素标准品和肉毒碱同位素标准品，均可以为本领域常规使用的标准品，且市售的各种同位素标准品均可以用于本发明，如美国剑桥实验室提供的同位素标准品，其种类及浓度如下表1所示：

表1