[发明专利]一种前列腺特异性抗原夹心型免疫传感器制备方法及应用

权利要求书

1.一种前列腺特异性抗原夹心型免疫传感器制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）将直径为4 mm的玻碳电极用0.05 μm的Al₂O₃抛光粉打磨，用超纯水清洗干净；将4~6 μL、0.5~2 mg/mL的Au-NH₂-GS纳米复合材料溶液滴加到处理好的裸电极上，放置4 ℃冰箱中干燥后再用超纯水冲洗，4 ℃冰箱中晾干；

（2）将4~6  μL、8 ~ 12 μg/mL的前列腺癌标志物一抗Ab₁溶液滴加到电极表面，放置4 ℃冰箱中干燥后再用超纯水冲洗，4 ℃冰箱中晾干；

（3）将3 μL、质量分数为0.5 ~ 3.0 %的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，以封闭电极表面上非特异性活性位点，放置4℃冰箱中干燥后再用超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；

（4）滴加4~6 μL、0.5 pg/mL~ 15 ng/mL的一系列不同浓度的前列腺癌标志物抗原标准溶液到电极表面，放置4℃冰箱中干燥后再用超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；

（5）将4~6 μL、3 ~ 6 mg/mL的GS-CNT-Pt/Ab₂二抗孵化物溶液滴涂于电极表面上，置于4℃冰箱中晾干后，超纯水冲洗，制得前列腺特异性抗原夹心型免疫传感器。

2.如权利要求1所述的一种前列腺特异性抗原夹心型免疫传感器制备方法，所述Au-NH₂-GS纳米复合材料溶液，其特征在于，制备步骤如下：

（1）金纳米粒子溶液的制备

将100 mL、质量分数为0.01~0.02％的HAuCl₄溶液加热至沸，滴加2.0~3.0 mL、质量分数为0.5~1.5％的柠檬酸钠水溶液，溶液颜色变为红棕色，冷却至室温；

氨基化石墨烯NH₂-GS的制备

0.05~0.2 g石墨烯分散在5~15 mL的乙醇中，超声搅拌1 h, 加入0.1~0.3 mL、质量分数为99％的3-氨丙基三乙氧基硅烷，在70℃条件下加热搅拌1.0~2.0 h；加入0.1mL、质量分数为80％的水合肼，95 ℃加热1 h；在9000 rpm的转速下离心20~40 min；在真空条件下干燥8~12 h，制得氨基化石墨烯NH₂-GS；

（3）Au-NH₂-GS纳米复合材料溶液的制备

称取10~20 mg的氨基化石墨烯NH₂-GS置于小烧杯中，加入10~20 mL金纳米溶液，搅拌10~14 h，离心后在真空条件35 ~45 ℃下干燥12 h，制得Au-NH₂-GS纳米复合材料，用水配制成0.5~2 mg/mL的Au-NH₂-GS纳米复合材料溶液。