[发明专利]一种坤灵丸的高效液相指纹图谱检测方法

权利要求书

1.一种坤灵丸的高效液相色谱指纹图谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)待测样品溶液的制备：

取坤灵丸样品，加入甲醇水溶液，超声溶解，再加入溶剂调整溶液浓度，微孔滤膜滤过；

2)待测样品指纹图谱的测定：

取滤液，注入高效液相色谱仪，得到色谱图，色谱条件为：

色谱柱固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流速为0.6～1.5ml/min、柱温为25～40℃、进样量为5～20μL；检测波长为272-276nm；

梯度洗脱方式为：

或

或

或

或

3)待测样品色谱图和标准对照指纹图谱相似度计算：

将待测样品的色谱图导入中国药典委的中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版软件，比较待测样品的色谱图和标准对照指纹图谱相似度。

2.根据权利要求1的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤1)待测样品溶液的制备方式为：

取坤灵丸适量，研成细粉，精密称取0.3～0.7g至5～15ml容量瓶中，加30％～70％甲醇适量，超声处理20～40min，冷却至室温，定容至刻度，摇匀，过0.4-0.5μm微孔滤膜。

3.根据权利要求2的指纹图谱检测方法，其特征在于，其中步骤1)待测样品溶液的制备方式为：取坤灵丸适量，糖衣丸除去糖衣，研成细粉，精密称取0.5g至10ml容量瓶中，加50％甲醇适量，超声处理30min，冷却至室温，定容至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜。

4.根据权利要求1的指纹图谱检测方法，其特征在于，其中步骤2)的色谱条件为：流速1.0ml/分钟、柱温30℃、检测波长：274nm、进样量为10μL。

5.根据权利要求1的指纹图谱检测方法，其特征在于，其中梯度洗脱方式为：

6.根据权利要求1的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤3)中所述标准对照指纹图谱建立方法，包括如下步骤：

(1)供试品溶液制备：

取坤灵丸，加入甲醇水溶液，超声溶解，再加入溶剂调整溶液浓度，微孔滤膜滤过，取滤液，即得；

(2)获得色谱图：

供试品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图；

(3)生成对照指纹图谱

选择合格的多批坤灵丸色谱图导入相似度评价系统，计算得相似度结果，并生成标准对照指纹图谱；

色谱条件为：

色谱柱固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流速为0.6～1.5ml/min、柱温为25～40℃、进样量为5～20μL；检测波长为272-276nm；

梯度洗脱方式为：

或

或

或

或

根据需要可以加入有效成分的标准对照品以作为参照物峰。

7.根据权利要求6的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤3)中所述标准对照指纹图谱建立方法，包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备，方法如下：

取坤灵丸适量，研成细粉，精密称取0.3～0.7g至5～15ml容量瓶中，加30％～70％甲醇适量，超声处理20～40min，冷却至室温，定容至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液即得，

(2)获得色谱图：

供试品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，同时以丹皮酚作为参照物；

丹皮酚标准对照品溶液，制备方法为：精密称取丹皮酚对照品适量，加30％～70％甲醇溶解制成每1ml含8～20μg的溶液，即得；

(3)生成对照指纹图谱，方法如下：

将多批坤灵丸样品的指纹图谱中8个峰为共有峰，以与丹皮酚对照品峰保留时间相同的色谱峰为参照峰，其他7个色谱峰的相对保留时间分别为：0.08、0.13、0.14、0.57、0.79、1.00、1.08、1.13，各峰的相对保留时间在±3％～±10％以内。