[发明专利]一种与奶牛产奶性状相关的分子标记及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种分子标记及其应用；特别涉及一种与奶牛产奶性状相关的分子标记及其应用，属于生物技术领域。

背景技术

许多研究发现，δEF1是广泛的转录抑制因子，是EEF1D基因转录和翻译出的蛋白，具有广泛的转录抑制功能，其主要通过N-端和C-端锌指结构簇与靶基因启动子中E2 box序列(5'-CA(G/C)(G/C)TG-3')结合，从而抑制靶基因的转录(Sekido et al.,1997；Higashi et al.,1997；Bellon et al.2009)。例如，δEF1可直接或间接参与多个物种的II型骨胶原基因Col2a1的负调控作用，通过与启动子中的E2 box(CACCT序列)结合达到抑制基因转录的作用(Murray et al.,2000)。在对人乳腺癌细胞去分化过程的研究中发现，δEF1通过与细胞粘连蛋白(E-cadherin)启动子序列中特定的反应元件(E2-box)直接结合而实现转录抑制作用。同时，δEF1能够显著抑制诱导成骨蛋白(BMP-2)因子，抑制小鼠前成肌细胞向成骨细胞分化(Yang et al，2007)。Takashi等(1999)研究发现δEF1氨基端靠近N-锌指结构簇存在的NR结构域也与转录抑制有关。同样，Sekido等(1997)将编码δEF1的NR结构域的cDNA连接到Gal4(1-147)基因的下游构建Gal4-NR融合基因，发现它能够显著抑制下游靶基因的转录，说明δEF1的NR结构域具有潜在的转录抑制活性。Furusawa等(1999)发现，在小鼠的胚胎发育过程中，不同组织中CtBP与δEF1的表达具有很高的协同性，CtBP可能作为共抑制物参与δEF1的转录抑制作用。但也有研究者发现，δEF1 C-端酸性结构域已被检测并证实具有一定的转录激活作用，但活性具有DNA序列或细胞特异性，物种间无特异性(Dillner et al.,2002；Dillner et al.,2004)。

对于δEF1的其他生物学功能研究有，对小鼠胚胎干细胞中靶向敲除编码δEF1的C-末端的基因序列(包括C-端锌指结构簇)后，发现纯合子小鼠的胸腺发育极差，没有形成明显的皮质和髓质，并伴有胸腺细胞数量减少和功能缺陷。上述结果表明，δEFl能够特异性调控胸腺T细胞在不同阶段的发育(Higashi Y，1997)。有一些研究者共同发现，在不同细胞的肿瘤发生过程中δEF1是一种潜在的调控因子。例如，在胸肺部的肿瘤细胞中，δEF1与肿瘤细胞EMT(上皮细胞间质样转化)过程有关，促进了肿瘤细胞向其他器官的转移(Thiery,2002；Eger et al.,2005；Yang et al.,2007)。软骨细胞增殖与分化因子(Ihh)对软骨生长与增殖具有调控作用，靶向灭活小鼠δEF1锌指结构簇区域后，导致长骨缩短、关节融合等骨骼发育畸形情况。研究表明，δEF1对Ihh的表达具有负调控作用(Bellon et al.,2009)。由于目前在牛和其他家畜上尚未发现与δEF1有关报道，根据EEF1D基因在人、鼠等物种上同源性比对结果，可以推测δEF1在牛上同样属于一种转录抑制因子，具有广泛的抑制靶基因转录的功能。

牛EEF1D基因定位于14号染色体上，全长12kb，由8个外显子和7个内含子组成。其mRNA全长1163bp，共编码280个氨基酸(Zimin et al.,2009)。

聚合酶链式反应(PCR)技术是一种特异性DNA体外扩增技术。以少量的DNA为模板，经过变性-退火-延伸的多次循环，以接近指数扩增的形式产生大量的目标DNA分子，目前，该技术已经成为最常用、也最重要的分子生物学技术之一。PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳后测序即可进行基因多态的鉴定工作，检测方法简单易行。