[发明专利]一种从紫花苜蓿茎中制备多糖及糖蛋白的方法

权利要求书

1.一种从紫花苜蓿茎中制备纯多糖及糖蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(a)采用85vol％-100vol％乙醇水溶液加热处理紫花苜蓿茎粉，脱酯并除去小分子组分，过滤收集第一残渣；

(b)采用水加热处理步骤(a)得到的第一残渣，过滤分别收集第一滤液和第二残渣；

(c1)将步骤(b)收集得到的第一滤液浓缩后，加入85vol％-100vol％乙醇水溶液，沉淀得到水溶性粗多糖；

(c2)将浓度为0.5M-2.5M的NaOH溶液加入到步骤(b)收集得到的第二残渣搅拌提取，过滤分别收集第二滤液和第三残渣；

(d1)加入85vol％-100vol％乙醇水溶液到步骤(c2)获得的第二滤液中，过滤分别收集第一上清液和沉淀物冷碱可溶性粗多糖，将第一上清液浓缩后调节至酸性，分离得到第二上清液和沉淀物第一糖蛋白粗组分，将第二上清液调节至中性，超滤脱盐得到第二糖蛋白粗组分；

(d2)采用浓度为0.5M-2.5M的NaOH溶液加热处理步骤(c2)获得的第三残渣，过滤收集第三滤液和第四残渣，加入85vol％-100vol％乙醇水溶液到第三滤液，过滤收集沉淀物热碱可溶性粗多糖。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法在步骤(a)前还包括对紫花苜蓿茎进行干燥、粉碎、过筛获得所述紫花苜蓿茎粉的步骤。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(a)中，所述紫花苜蓿茎粉与所述乙醇水溶液的料液比为1g：5-25mL；和/或

步骤(a)中，加热温度为50-85℃，加热时间为0.5-5h。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(b)中，所述第一残渣与水的料液比为1g：10-50mL；和/或

步骤(b)中，加热温度为50-85℃，加热时间为0.5-5h。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(c1)中，采用减压浓缩第一滤液，浓缩后的第一滤液的体积与加入的乙醇水溶液的体积比为1：2-8，较佳地为1：3-5。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(c2)中，所述第二残渣与NaOH溶液的料液比为1g：10-50mL；和/或

步骤(c2)在15-30℃将NaOH溶液加入第二残渣中，搅拌8-24h后过滤。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(d1)中，所述第二滤液与乙醇水溶液的体积比为1：1-8，较佳地为1：2-5。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(d2)中，所述第三残渣与NaOH溶液的料液比为1g：10-50mL；和/或

步骤(d2)中加热温度为60-90℃，较佳地为70-80℃，加热时间为1-5h，较佳地为1.5-3h。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括冻干、纯化步骤，所述冻干、纯化步骤是将选自下组的组分冻干后采用超滤和/或柱层析进行纯化：

步骤(c1)得到的水溶性粗多糖、步骤(d1)得到的冷碱可溶性粗多糖、步骤(d1)得到的第一糖蛋白粗组分、步骤(d1)得到的第二糖蛋白粗组分、步骤(d2)得到的热碱可溶性粗多糖。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述超滤是采用截留分子量为8-15KDa的超滤膜进行超滤；和/或

所述柱层析是指采用选自下组的一种或两种以上的填料进行柱层析：Sephacryl S200、Sephacryl S400、Sephacryl S1000、Sephadex G-200。