[发明专利]一种人类免疫缺陷病毒抗原抗体联合检测试剂盒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种人类免疫缺陷病毒抗原抗体联合检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

(1)双标记酶结合物；

(2)阴阳性对照物；

(3)发光液；所述发光液包括发光液1和发光液2，发光液1为含有0.7g/L鲁米诺，0.9g/L肉桂酸，0.2g/L4-碘苯硼酸，0.25g/L对碘苯酚，25ml/L二甲基甲酰胺，5g/L聚乙烯醇，8g/L聚乙烯吡咯烷酮，3g/L聚乙二醇600，4g/L乙二胺四乙酸，160万单位/L硫酸庆大霉素，0.4g/L过氧化脲，pH9.0的0.1mol/L的Tris缓冲液；发光液2为含有0.1mg/ml吖啶酯衍生物、3g/L聚乙二醇600、0.1％TWEEN-20pH9.0的0.1mol/L的Tris缓冲液；

(4)微孔包被板。

2.根据权利要求1所述的一种人类免疫缺陷病毒抗原抗体联合检测试剂盒，其特征在于，所述双标记酶结合物的制备方法是：采用改良高碘酸钠氧化法，将辣根过氧化物酶标记到HIV嵌合抗原上，采用EDC法将碱性磷酸酶标记到另一P24单抗上，将嵌合抗原-HRP按照0.1μg/ml，p24mab-ALP按照0.2μg/ml稀释到含有牛血清白蛋白和proclin300的酶结合物稀释液中，作为酶工作液，于2～8℃下储存。

3.根据权利要求1所述的一种人类免疫缺陷病毒抗原抗体联合检测试剂盒，其特征在于，所述微孔板包被制备方法是：将包含有gp36，gp41，gp120的嵌合抗原和p24单抗用0.02M磷酸盐缓冲液稀释至1～10μg/mL，同时加入到96孔白色不透明塑料微孔板中，37℃包被2小时或2-8℃包被16小时；弃去孔内液体，用pH7.4PBS缓冲液洗板，然后加入含0.5％BSA的磷酸盐缓冲液封闭微孔板，37℃封闭2小时或2-8℃封闭16小时；弃去孔内液体，甩干后于37℃烘干4小时；装入铝箔袋，加入干燥剂，封口，贴标签，储存于2～8℃。

4.根据权利要求1所述的一种人类免疫缺陷病毒抗原抗体联合检测试剂盒，其特征在于，所述阴阳性对照物分别为：阴性混合人血清作为阴性对照，在阴性血清中加入HIV-1抗体作为阳性对照1，在阴性血清中加入HIV-2抗体作为阳性对照2，在阴性血清中加入p24抗原作为阳性对照3。

5.权利要求1-4任一权利要求所述本发明试剂盒的使用方法：

(1)将50μl阴性对照和三个阳性对照及待检样品分别加入微孔板不同微孔中，37℃孵育30分钟；

(2)用含有tween20的Tris盐缓冲液清洗微孔板5次，拍干；

(3)每孔加入50μl双标记酶结合物，37℃孵育30分钟；

(4)同第(2)步完成清洗后，每孔各加入100μl发光液1，孵育5分钟用光子计数器读数，所测发光值以阴性对照的2.1倍作为cutoff判定值进行S/CO计算；

(5)完成读数后同第(2)步完成清洗后，每孔加入100μl发光液2，孵育10分钟用光子计数器读数，所测发光值以阴性对照的2.1倍作为cutoff判定值进行S/CO计算；

(6)第(4)步所测S/CO值大于等于1的样本判定为抗体阳性；

(7)第(5)步所测S/CO值大于等于1的样本判定为抗原阳性；

(8)第(6)步和第(7)步所测S/CO的和为抗原抗体联合检测结果。