[发明专利]一种靶向bFGF高亲和力受体结合位点的抗体及其应用

说明书

技术领域

 本发明属于生物技术领域。更具体地，涉及一种靶向bFGF高亲和力受体结合位点的抗体及其应用。

背景技术

碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）又名成纤维细胞生长因子-2 （fibroblast growth factor 2，FGF2），是21种结构相关的成纤维细胞生长因子蛋白家族成员之一。 bFGF相对分子量为18KD，22 KD， 22.5 KD，24KD和34KD。目前研究得较多的为18 KD亚型的bFGF，它也是bFGF的主要活性形式。bFGF是继血管内皮细胞生长因子（Vascular endothelial growth factor ，VEGF）之后的最重要的刺激血管新生的细胞因子之一，其参与多种肿瘤（如神经胶质瘤、横纹肌瘤、白血病、肾癌、肺细胞瘤、黑色素瘤、肝癌、前列腺癌、结肠癌等）的生长，有相当部分的肿瘤出现bFGF以及其高亲和力受体-成纤维细胞生长因子受体（fibroblast growth factor receptor，FGFR）的高表达。bFGF不仅通过旁分泌和自分泌等途径促进局部血管生成，还能直接作用肿瘤细胞促进其增殖和加速肿瘤浸润和转移。体内外试验证实，bFGF还能促进多种生长因子分泌，与VEGF、血小板生长因子（Platelet-derived growth factor，PDGF）等具有协同作用，共同促进肿瘤发生。

FGF家族成员主要通过与其高亲和力受体-成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor，FGFR）的结合向细胞内传递信号，发挥其生物学活性。此受体又称受体酪氨酸激酶（Receptor tyrosine kinase，RTKs），存在FGFR-1，FGFR-2，FGFR-3，FGFR-4四种蛋白。完整的FGFR分子由细胞外配体结合结构域，跨膜结构域，以及包含具有催化活性的蛋白酪氨酸中心的胞内结构域。胞外配体结合结构域由3个IgG样的结构域组成，称为D1、D2、D3。FGF主要与D2、D3区结合。bFGF除不与FGFR-2b结合外可与其他几类FGFR亚型结合，包括FGFR-1b、FGFR-1c、FGFR-2c、FGFR-3b、FGFR-3c、FGR-4。不同的受体亚型在肿瘤发生发展的进程中发挥不同的作用，其中FGFR-1在血管内皮细胞及多种肿瘤细胞表面高表达，是bFGF的主要受体。bFGF/FGFR信号通路对细胞增殖和生长的调节起着重要作用，研究证实多种肿瘤可通过bFGF过表达改变bFGF/FGFR信号通路促进肿瘤生长。FGFR-1的近膜结构域407-433个氨基酸在无bFGF刺激时就与FRS2家族的停泊蛋白FRS2α、FRS2β结合，在受到bFGF刺激后，二者发生磷酸化而募集Grb2/Sos复合物，从而导致Ras/MAPK 信号途径的激活，其下游靶蛋白为一些转录蛋白和抗凋亡蛋白，可调节细胞的存活及增殖。此外PI3K/Akt途径及PKA途径也是参与bFGF功能的重要信号途径，多种信号途径之间相互调节共同发挥作用。

Erinar K等为了研究VEGF、PD-ECGF（platelet derived endothelial cell growth factor，血小板衍化内皮细胞生长因子）、bFGF、IL-8在黑色素瘤血管新生及转移中的作用，他们使用分别抗这四种细胞因子的抗体进行研究，发现抗体可显著抑制黑色素瘤的自发转移及肺克隆的形成。Loilome等研究表明，bFGF单抗通过阻断FGF信号传导通路有效抑制神经胶质瘤生长。Rofstad等研究显示bFGF抗体能抑制鼠移植黑色素瘤的生长、血管形成和转移。曾世彬等研究显示bFGF抗体既可以中和游离的bFGF，降低组织中的bFGF浓度，也可以与已经同膜型受体结合的bFGF/FGFR复合物结合，从而阻断bFGF与其受体的结合及后续细胞信号转导，抑制bFGF诱导的黑色素瘤细胞增殖及新生血管形成。谢庆祥等研究显示bFGF单抗在裸鼠体内呈浓度依赖性抑制膀胱癌生长。bFGF及FGFR-1高表达于包括黑色素瘤，肺癌，乳腺癌在内的多种肿瘤组织，且与肿瘤的转移、分期、预后相关，阻断bFGF的作用具有显著的抗肿瘤及抗肿瘤血管新生效果，bFGF/FGFR系统成为抗肿瘤治疗的新靶点。

因此，探索阻断bFGF/FGFR信号通路的技术和方法对抗肿瘤治疗具有重大的意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种可以阻断bFGF/FGFR信号通路的方法，进而抑制肿瘤细胞增殖及体内抑制肿瘤生长。