[发明专利]基于AuNPs@AgNCs纳米复合材料的免疫电化学传感器及其构建与应用

权利要求书

1.一种基于AuNPs@AgNCs纳米复合材料的免疫电化学传感器的制备方法，其特征在于，以单链寡聚核苷酸为模板，合成寡聚核苷酸稳定的银纳米簇；带巯基的互补DNA单链通过Au-S键结合到金纳米粒子表面，再两条互补单链杂交，得到AuNPs@AgNCs复合纳米杂化物；然后以石墨烯为基底固定PSA抗体1，PSA作为分析物，AuNPs@AgNCs标记抗体2，由于抗原抗体之间的特异性结合，得到用于检测乳腺癌患者血清PSA的免疫传感器；

或者以石墨烯为基底固定PSA抗体1，free-PSA和total-PSA分别作为分析物，AuNPs@AgNCs标记抗体2，由于抗原抗体之间的特异性结合，得到用于检测前列腺癌或前列腺增生患者血清free-PSA和total-PSA的免疫传感器。

2.根据权利要求1所述的基于AuNPs@AgNCs纳米复合材料的免疫电化学传感器的制备方法，其特征在于，

(1)DNA-AgNCs的制备：模板链S2和AgNO₃溶液加入到磷酸缓冲液中，然后，NaBH₄溶液加入到上述溶液中，得到的溶液震荡，然后放在4℃冰箱中于暗处过夜；

(2)AuNPs@AgNCs纳米复合材料的制备：DNA单链S1和链霉亲和素标记的金纳米粒子混合，震荡后，静置，得到的混合物离心，移去上层清液，加PBS分散沉淀物，得到S1/SA-AuNPs；然后，将步骤(1)得到的S2/AgNCs加入到S1/SA-AuNPs溶液中加热，冷却至室温，即制得；

(3)AuNPs@AgNCs纳米复合材料标记Ab₂：AuNPs@AgNCs纳米复合材料与生物素修饰的单克隆抗体Ab₂混合反应，得到的AuNPs@AgNCs/Ab₂纳米复合材料溶液离心，用PBS缓冲溶液洗涤，备用；

(4)免疫传感器的制备：将裸玻碳电极抛光打磨至镜面，超声洗涤，吹干，用于电极修饰；将壳聚糖修饰的石墨烯纳米杂化片分散液滴于裸玻碳电极表面，自然烘干；再将1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的混合液滴于裸玻碳电极表面，冲洗；然后，抗体Ab₁滴于电极表面，37℃下密封培养后，冲洗；为了阻塞多余的活性基团及抗原与电极之间的非特异性结合，将电极进一步在BSA中于37℃下培养后,冲洗，不同浓度的PSA溶液分别滴加到电极表面，37℃下培养，冲洗掉未结合的PSA分子，将制备的AuNPs@AgNCs/Ab₂滴到电极表面，37℃培养后，冲洗，即可制得用于检测乳腺癌患者血清PSA的电极；

制备用于检测前列腺癌或前列腺增生患者血清free-PSA和total-PSA的免疫传感器时，将2支同样经过上述处理的裸玻碳电极表面分别滴加不同浓度的free-PSA和total-PSA溶液，37℃下培养，冲洗掉未结合的free-PSA和total-PSA分子，将制备的AuNPs@AgNCs/Ab₂滴到电极表面，37℃培养后，冲洗，即可。

3.根据权利要求2所述的基于AuNPs@AgNCs纳米复合材料的免疫电化学传感器的制备方法，其特征在于，

DNA-AgNCs的制备具体过程：40-60μL 100μM的模板链S2：3’-ACG CAT GCC GGC CCC TAA CTC CCC-5’和0.6-1.0μL 50mM AgNO₃溶液加入到pH＝7.0-8.0磷酸缓冲液中，使得Ag⁺：S2＝7-9,然后，0.6-1.0μL 50mM新制的NaBH₄溶液加入到上述溶液中，得到的溶液强烈震荡至少1min，得到的S2/AgNCs放在4℃冰箱中于暗处过夜。