[发明专利]一种皮肤模型低温保存的固体培养基及其保存方法

权利要求书

1.一种可用于组织工程皮肤模型的低温保存用固体培养基，其组分包括：细胞培养液及其添加成分，细胞培养液是MCDB153，DMEM，HTS液，F12，或F12和DMEM混合培养液；F12和DMEM混合培养液的体积比1:1或1:3；其特征在于，添加成分包括：缓冲体系HEPES、Agarose(Low melting gel)，低温保护剂海藻糖、蔗糖、甘氨酸、丙氨酸、腺苷、α-生育酚、维生素C、去铁胺(DFO)、1,6-二磷酸果糖(FDP)；

所述各添加成分,浓度分别为：缓冲体系HEPES 1～100mmol/L、琼脂糖0.25％～2％、海藻糖0.1～10mmol/L、蔗糖0.1～30mmol/L、甘氨酸1～100mmol/L、丙氨酸0.5～50mmol/L、腺苷1～100mmol/L、α-生育酚0.01～10mmol/L、维生素C 0.01～10mmol/L、去铁胺(DFO)0.01～10mmol/L、1,6-二磷酸果糖(FDP)0.1～10mmol/L。

2.一种如权利要求1所述的可用于组织工程皮肤模型的低温保存用固体培养基的配制方法如下,其特征在于：

一.制备A液、B液

A液：在细胞培养液中，分别加入HEPES、海藻糖、蔗糖、甘氨酸、丙氨酸、腺苷、α-生育酚、维生素C、去铁胺(DFO)、1,6-二磷酸果糖(FDP)，添加无先后顺序，充分溶解后，过滤除菌；

B液：将低熔点(28-32℃成胶，62-68℃熔化)琼脂糖用去离子水溶解，灭菌备用；

二.振荡混匀

按照体积比1:1的比例,在B液中缓慢加入A液，振荡混匀后，获得皮肤模型低温保存运输的固体培养基。

3.一种如权利要求1或2所述的可用于组织工程皮肤模型的低温保存用固体培养基的使用方法,其特征在于：

1)将培养完成的皮肤模型连同外部培养小室嵌入固体培养基；

2)将固体培养基连同皮肤模型置于无菌袋中封口，4℃～8℃条件下保存24～72小时；

3)在皮肤模型使用前，将组织工程模型放在表皮细胞培养液中，在二氧化碳培养箱中复苏18～24小时，即可用于后续检测项目。