[发明专利]维生素A、E的测定方法和相应的在线固相萃取分析系统

说明书

技术领域

本发明涉及一种对动物源食品中的维生素A、E进行测定的方法。具体而言，本发明采用固相萃取与高效液相色谱联用技术，建立了一种在线固相萃取-高效液相色谱同时测定动物源食品中维生素A、E的分析方法。此外，本发明还提供了用于对维生素A、E进行检测的在线固相萃取分析系统。

背景技术

维生素A和维生素E是机体维持正常生理功能和物质能量代谢必需的微量营养成分，具有调节生长、维持视觉、促进生殖和延缓衰老等生物效应，但是它们在体内不能合成或合成量不足以满足身体需要，必须通过食物进行补充。肝脏、蛋类和乳品等动物源食品含有丰富的维生素A、E，是人体所需脂溶性维生素的重要来源。由于脂溶性维生素化学性质不稳定，易受光照、空气和温度影响导致氧化分解，而且动物源食品蛋白脂肪含量高，干扰因素多，高效提取和测定复杂基质食品中维生素A、E仍然是维生素分析技术的难点。目前维生素A和维生素E的分析方法主要有层析法、比色法、荧光法、电化学法、气相色谱法和高效液相色谱法，其中以高效液相色谱法最为常用。

现行食品检验标准在内的大多数脂溶性维生素分析方法的样品前处理主要包括皂化、萃取、浓缩、净化等步骤。对于萃取步骤而言，目前动物源食品中脂溶性维生素的测定方法大多采用液液萃取净化样品，并被维生素A、E国家标准检验方法所采用。虽然该方法净化效果好，杂质干扰少，但是存在操作耗时，有机溶剂消耗量大，待测组分易损失等不足。由于涉及多次萃取、浓缩和溶解等步骤，操作繁琐、费时，容易造成待测组分损失，数据准确性与操作人员实验技能密切相关，样品测定结果误差较大且重现性不好。

因此，本领域中迫切需要新的技术手段来提高复杂基质样品的分析效率。

发明内容

为解决上述课题，本研究利用在线固相萃取净化技术结合高效液相色谱，建立了一种简便、快捷测定动物源食品中维生素A、E的分析方法，实现了复杂基质样品的萃取净化与浓缩全程自动化，显著缩短了样品处理时间，改善了测定结果的准确性和重现性。

本发明提供了一种对维生素A、E进行测定的方法，该方法包括将经过预处理的待测样品进行在线固相萃取分析，其中，该预处理包括在碱的存在下对样品进行皂化，该在线固相萃取分析包括如下步骤：

(a)将该经过预处理的待测样品泵入固相萃取柱，通过洗脱除去杂质，将待测的维生素A、E保留在该固相萃取柱上；

(b)通过切换六通阀，将该固相萃取柱与分析柱在流路上串联，进行维生素A、E的分离；

(c)使该分析柱的流出液进入检测器进行检测。

此外，本发明还提供了用于对维生素A、E进行检测的在线固相萃取分析系统，该系统包含第一泵、进样器、六通阀、固相萃取柱、第二泵、分析柱和检测器，该进样器在流路上串联于该第一泵的下游，该检测器在流路上串联于该分析柱的下游，该六通阀用于切换该系统的两种工作状态：在第一工作状态下，该固相萃取柱在流路上串联于该进样器的下游，该分析柱在流路上串联于该第二泵的下游；在第二工作状态下，该固相萃取柱在流路上串联于该第二泵的下游，该分析柱在流路上串联于该固相萃取柱的下游。

本研究利用固相萃取柱配合切换阀取代传统的前处理过程，建立了一种在线固相萃取与高效液相色谱联用方法用于同时测定动物源食品中的维生素A和维生素E。皂化处理的样品经固相萃取柱净化浓缩后在线转移至分析柱进行检测，极大减少了前处理过程中维生素A、E的损失。该方法可实现复杂基质样品的自动在线净化，具有分析效率高，溶剂消耗少，测定结果准确且重现性好等特点，为动物源食品中维生素A、E的测定提供了更为简便、灵敏、可靠的分析方法。

附图说明

图1为本发明一个实施方式所述在线固相萃取分析工作流程示意图，图1A和图1B分别示出通过六通阀进行切换的两种流路工作状态。

图2为示出萃取溶剂在不同的柱上对维生素A、E回收率的影响的柱状图。

图3为示出不同的固相萃取柱对配方乳粉样品杂质净化的影响的曲线图。

图4示出了配方乳粉样品未使用在线固相萃取净化(色谱条件采用国标方法)和使用在线固相萃取净化(本发明的方法)的色谱图比较，其中图4A为未使用在线固相萃取净化方法的结果，图4B为采用本发明所述方法的结果。

图5示出了采用本发明的方法对不同样品进行测定的色谱图，其中a对应猪肝样品，b对应鸡蛋样品，c对应配方乳粉样品。

具体实施方式