[发明专利]用Alu基因的同源基因B1基因且无需DNA提取的检测血浆游离DNA的定量PCR方法

权利要求书

1.一种用Alu基因的同源基因B1基因重复序列基因扩增引物且无需DNA抽提的检测血浆游离DNA的定量PCR方法，其特征是人类基因中最丰富的Alu基因在大、小鼠中的同源基因B1基因，并设计了扩增引物，设计的扩增引物是：正向：5’-CCAGGACACCAGGGCTACAGAG-3’；反向：5’-CCCGAGTGCTGGGATTAAAG-3’；扩增长度109bp，在训练前、训练后即刻采血，选择静脉血20μl，肝素或EDTA抗凝，离心、收集血浆，血浆稀释5倍；无需DNA抽提进行定量PCR扩增；比较训练前、训练后即刻的血浆游离DNA水平。

2.根据权利要求1所述的用Alu基因的同源基因B1基因重复序列基因扩增引物且无需DNA抽提的检测血浆游离DNA的定量PCR方法，其特征在于定量PCR的反应体系：MaximaSYBRGreen/ROXqPCRMasterMix(2x)，12.5μl；正向和反向引物(50μM)，各0.2μl；标准品或5倍稀释后的样品，各1.0μl；不含DNA酶的水，11.1μl。

3.根据权利要求1所述的用Alu基因的同源基因B1基因重复序列基因扩增引物且无需DNA抽提的检测血浆游离DNA的定量PCR方法，其特征在于扩增条件：95℃预变性8min，然后进行40个循环的扩增，分别是95℃变性30秒，55℃退火40秒和72℃延伸1分钟。

4.根据权利要求1所述的用Alu基因的同源基因B1基因重复序列基因扩增引物且无需DNA抽提的检测血浆游离DNA的定量PCR方法，其特征在于是增加训练后多个时间点的血浆游离DNA水平检测，动态观察血浆游离DNA水平或过度训练的恢复过程。