[发明专利]枸橼酸原料中细菌内毒素的检测方法

权利要求书

1.一种枸橼酸原料中细菌内毒素的检测方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：首先选取L＜0.25EU/mg作为枸橼酸原料的细菌内毒素限值进行干扰试验，确定使用何种灵敏度的鲎试剂对枸橼酸原料进行细菌内毒素检查；然后将待测的枸橼酸原料稀释配制成待测溶液，最大有效稀释倍数MVD=20，加入上述干扰试验中确定的鲎试剂，在37±1℃的温度下反应60±2分钟，而后缓缓倒转180°观察管内凝胶情况，管内凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性；管内凝胶不能保持完整从管壁滑脱者为阴性；

当鲎试剂，供试品的配方，生产工艺改变或试验环境发生变化时，须重新进行干扰试验。

2.根据权利要求1所述的枸橼酸原料中细菌内毒素的检测方法，其特征在于，干扰试验的具体步骤如下：

步骤一、供试品溶液的制备

取枸橼酸原料50mg加入到试管中，加入10ml细菌内毒素检查用水，震荡，使原料充分溶解，即为样品溶液；用细菌内毒素检查用水将样品溶液稀释10倍，生成S₁₀溶液；再用Na₂HPO₄溶液将S₁₀溶液稀释2倍，生成S₂₀溶液；稀释后的S₂₀溶液作为供试品溶液，即溶液A；

步骤二、三组对照溶液的制备

将供试品溶液与细菌内毒素标准品制成分别含细菌内毒素浓度2.0λ、1.0λ、0.5λ和0.25λ的内毒素溶液，作为溶液B；每一浓度平行各做4支；

用细菌内毒素检查用水与细菌内毒素标准品制成分别含细菌内毒素浓度2.0λ、1.0λ、0.5λ和0.25λ的内毒素溶液，作为溶液C；每一浓度平行各做4支；

取细菌内毒素检查用水，作为溶液D；

步骤三、细菌内毒素检测

向盛装有上述四组溶液的各个试管中加入一定灵敏度的鲎试剂，轻轻混匀后，垂直放入37±1℃试管恒温仪中，保温60±2分钟；将试管从恒温仪中轻轻取出，缓缓倒转180°，观察并记录各个试管的细菌内毒素检测结果；

步骤四、统计分析

当溶液A和溶液D所有试管均为阴性；溶液B和溶液C中的最大浓度2.0λ管均为阳性，最低浓度的0.25λ管均为阴性时，试验结果有效;按统计学方法分别计算溶液C的反应终点浓度的几何平均值Es和溶液B的反应终点浓度的几何平均值Et；当0.5λ≤Es≤2.0λ、且0.5Es ≤Et≤2.0Es时，则试验有效，认为供试品在该浓度下不存在干扰作用，确定该灵敏度的鲎试剂；如Et不在此规定范围内，则应重新更换灵敏度更高的鲎试剂重复进行以上试验内容。