[发明专利]一种PCR检测蝗虫微孢子虫病的方法有效
| 申请号： | 201410397744.1 | 申请日： | 2014-08-13 |
| 公开（公告）号： | CN104195237A | 公开（公告）日： | 2014-12-10 |
| 发明（设计）人： | 班丽萍;张靓;曹江波;宋丽梅 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 pcr 检测 蝗虫 孢子 方法 | ||
1.一种用于检测蝗虫微孢子虫病的PCR引物，其特征在于，
所述引物包括：
上游引物Nlos-F5：5’-GCTCC AAATA CAGCG TAAAT GC-3’(SEQ ID NO：1)；
下游引物Nlos-R5：5’-GAGAT TCGCA TTCGC CACAG C-3’(SEQ ID NO：2)。
2.含有权利要求1所述的引物的用于检测蝗虫微孢子虫病的试剂盒。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg2+、PCR反应缓冲液中的一种或多种。
4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准阳性模板。
5.一种PCR检测蝗虫微孢子虫病的方法，其是利用权利要求1所述的引物，或权利要求2-4任一项的试剂盒对蝗虫进行PCR检测。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)提取样品组织中的总DNA；
2)以步骤1)中的总DNA为模板，Nlos-F5和Nlos-R5为引物，进行PCR扩增反应；
3)分析PCR产物。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，PCR反应体系以25μl计为：
2×Taq Master Mix，12.5μl；10μM引物Nlos-F5，1μl；10μM引物Nlos-R5，1μl；DNA模板，1μl；ddH2O，9.5μl；总反应体系为25μl。
8.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，PCR反应条件为：95℃，5min，1个循环；94℃，30s，66℃，30s，72℃，30s，35个循环；最后72℃延伸10min，1个循环。
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