[发明专利]一种重组人促红素的无血清培养基，其应用以及重组人促红素的制备方法

权利要求书

1.一种重组人促红素的无血清培养基，其特征在于，所述的培养基包括基础培养基和添加剂，所述添加剂中含有4-羟乙基哌嗪乙磺酸、NaHCO₃和大豆蛋白水解液。

2.根据权利要求1所述的重组人促红素的无血清培养基，其特征在于，所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸的浓度为2.0～3.0g/L，NaHCO₃的浓度为0.08～0.16g/L，大豆蛋白水解液的添加量为100～400ml/L；优选为：4-羟乙基哌嗪乙磺酸的浓度为2.3～2.7g/L，NaHCO₃的浓度为0.10～0.13g/L，大豆蛋白水解液的添加量为200～400ml/L。

3.根据权利要求1所述的重组人促红素的无血清培养基，其特征在于，所述添加剂中还含有正丁酸钠、D-葡萄糖、D-甘露糖、D-半乳糖、N-乙酰葡萄糖胺。

4.根据权利要求1所述的重组人促红素的无血清培养基，其特征在于，所述的正丁酸钠的浓度为0.03g/L～0.2g/L，优选0.08～0.12g/L；D-葡萄糖的浓度为1.0g/L～5.0g/L，优选1.5～3.5g/L；D-甘露糖的浓度为0.4g/L～2.5g/L，优选0.5～1.5g/L；D-半乳糖的浓度为0.4g/L～2.5g/L，优选0.5～1.5g/L；N-乙酰葡萄糖胺的浓度为0.4g/L～2.5g/L，优选0.5～1.5g/L。

5.根据权利要求1所述的重组人促红素的无血清培养基，其特征在于，基础培养基选自CHOSFM培养基，浓度为10～20g/L，优选13～15g/L。

6.根据权利要求1所述的重组人促红素的无血清培养基，其特征在于，所述培养基的PH为6.9～7.3，优选为6.9～7.2，渗透压摩尔浓度为300～380mOsmol·kg^-1，优选为320～360mOsmol·kg^-1。

7.根据权利要求1所述的重组人促红素的无血清培养基，其特征在于，所述大豆蛋白水解液的制备方法为：取大豆蛋白粉100g，加80～85℃热水800mL，保持恒温20～30分钟，调节PH为5.0～7.0，加入2wt％的木瓜蛋白酶100ml，升温至90～93℃保持20～30分钟，用5μm的滤器过滤，加水至含氮量为1.0wt％。

8.一种如权利要求1～7任一权利要求所述的重组人促红素的无血清培养基在表达重组人促红素中的应用。

9.一种重组人促红素的制备方法，其特征在于，将CHO细胞经过复苏、预培养、采用含血清的培养基增殖培养后，除去有血清培养液，接种于权利要求1～7任一权利要求所述培养基的培养瓶进行无血清培养，收获上清液经纯化即得。