[发明专利]一种快速提取和纯化福尔马林固定组织中DNA的方法在审
| 申请号： | 201410383891.3 | 申请日： | 2014-08-06 |
| 公开（公告）号： | CN104328108A | 公开（公告）日： | 2015-02-04 |
| 发明（设计）人： | 翟仙敦;莫耀南;秦豪杰;张振芳;薛小琦;赵贵森;艾红伟 | 申请（专利权）人： | 河南科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 郑州睿信知识产权代理有限公司 41119 | 代理人： | 牛爱周 |
| 地址： | 471003 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 提取 纯化 福尔马林 固定 组织 dna 方法 | ||
1.一种快速提取和纯化福尔马林固定组织中DNA的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)取福尔马林固定组织，蒸馏水冲洗后破碎组织，用滤纸吸干；
(2)在步骤(1)的组织中加入无水乙醇浸泡1～5分钟，离心，弃去上清；再依次加入浓度70～80％的乙醇和浓度40～60％的乙醇，重复以上步骤，最后留取沉淀；
(3)在步骤(2)留取的沉淀中加入细胞裂解液、十二烷基磺酸钠和蛋白酶K，在温度55～65℃下孵化处理，离心，取上清液；
(4)在步骤(3)的上清液中加入盐，混匀，在温度-4～4℃下静置分层，离心，取上清液；
(5)在步骤(4)的上清液中加入DNA结合液，混匀，转移到固定有二氧化硅膜的套管内，离心，弃去液体，洗脱DNA，即得。
2.根据权利要求1所述的快速提取和纯化福尔马林固定组织中DNA的方法，其特征在于：所述步骤(2)中离心的转速为10000～12000rpm，离心时间3～5分钟。
3.根据权利要求1所述的快速提取和纯化福尔马林固定组织中DNA的方法，其特征在于：所述步骤(3)中细胞裂解液组成为：NaCl 0.4mol/L、Tris-HCl 0.01mol/L、EDTA 0.002mol/L，余量为水。
4.根据权利要求1所述的快速提取和纯化福尔马林固定组织中DNA的方法，其特征在于：所述步骤(3)中孵化处理的时间为8～10小时。
5.根据权利要求1所述的快速提取和纯化福尔马林固定组织中DNA的方法，其特征在于：所述步骤(3)中离心的转速为11000～15000rpm，离心时间8～15分钟。
6.根据权利要求1所述的快速提取和纯化福尔马林固定组织中DNA的方法，其特征在于：所述步骤(4)中盐为氯化钠。
7.根据权利要求1所述的快速提取和纯化福尔马林固定组织中DNA的方法，其特征在于：所述步骤(4)中静置的时间为5～15分钟。
8.根据权利要求1所述的快速提取和纯化福尔马林固定组织中DNA的方法，其特征在于：所述步骤(5)中DNA结合液组成为：5mol/L盐酸胍，35％乙醇。
9.根据权利要求1所述的快速提取和纯化福尔马林固定组织中DNA的方法，其特征在于：所述步骤(5)中离心的转速为3000～4000rpm，离心时间1～5分钟。
10.根据权利要求1所述的快速提取和纯化福尔马林固定组织中DNA的方法，其特征在于：所述步骤(5)中在洗脱DNA前，需采用浓度70～80％乙醇洗涤套管，再用蒸馏水洗脱DNA。
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