[发明专利]一种冬虫夏草发酵液回收孢子半连续培养方法

说明书

技术领域

本发明冬虫夏草发酵培养技术领域，尤其是一种冬虫夏草发酵液回收孢子半连续培养方法。 

背景技术

冬虫夏草是国家二类保护植物，主要分布于西藏、青海、四川、云南和甘肃等省(区)的高山草甸中，具有滋肾补肺、养心益肝、增强抗病能力的功效。但，由于冬虫夏草成长的特殊性，变得十分的稀有和珍贵，而国内外对冬虫夏草的需求量成倍增长，价格猛增，促使了人们过度采挖，严重的破坏了冬虫夏草自然资源，为了满足市场的需求，缓解冬虫夏草自然资源的破坏，人工培养冬虫夏草的思路得到了开拓。当前，已经形成了对冬虫夏进行人工培养的诸多方法，并且，深层发酵生产的冬虫夏草菌丝与天然的冬虫夏草具有相似的成份和类同的药理作用，因此，目前普遍采用的是液体深层发酵工艺来培养冬虫夏草。 

但是，在冬虫夏草菌深层发酵工艺中，均是采用孢子与发酵液分离之后，再将孢子作为种子液来进行下一次发酵生产，这样使得孢子种子液需要再度适应环境，可在进行孢子与发酵液分离，通常是采用板框过滤的方式，来分离发酵液和冬虫夏草菌丝体，这样使得进入滤液的菌丝体较多，菌丝体的收率较低，污水的处理量较大，细胞体容易被损坏，丢失掉细胞内的部分有效成分。 

并且，冬虫夏草菌丝的生长条件较为严格、生长速度慢，使得发酵培养周期长，造成发酵能耗大，发酵成本高，进而使得生产效率低，培养成本大。 

为此，有研究者从上述技术问题对冬虫夏草菌丝体的分离提取方法以及冬虫夏草菌丝粉的生产方法做出了研究，如专利号为CN201210344464.5的《一种基于膜技术提取虫草被孢菌丝体的方法》的发明专利公开了将虫草被孢发酵液通过微滤膜处理分离得到虫草被孢菌丝体，改变了传统虫草被孢分离所用离心方式；专利号为CN200810095732.8的《用膜过滤生产冬虫夏草菌丝粉的方法》公开了把发酵法生产的最终菌液用转鼓真空过滤，得到的滤液采用膜过滤法进行过滤，过滤后的固体物经微波干燥、粉碎得冬虫夏草菌丝粉，过滤后的滤液经浓缩、喷雾干燥后得冬虫夏草营养粉，此方法可有效回收约10～25％的冬虫夏草菌丝，它减少了很大浪费，降低了生产成本，提高了生产效率，有很好的经济和社会效益；即以上现有技术没有从冬虫夏草培养过程的营养保护作出研究，即使采用膜过滤的方式来替代传统的离心方式，避免虫草细胞体的破损，排除部分营养流入发酵液中，但其效果均较为不理想；并且对于冬虫夏草的培养周期没有作出研究，使得冬虫夏草的培养成本较大，利润较低。 

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种冬虫夏草发酵液回收孢子半连续培养方法，其具有：能够有效分离冬虫夏草发酵液与孢子，使得孢子数量较大，孢子作为种子液进行再次培养的环境条件温和，缩短孢子种子液对环境的适应时间，进而缩短冬虫夏草的发酵培养时间，提高了生产效率，降低生产电耗等特征。 

为了实现上述的发明目的，本发明具体是通过以下技术方案得以实现的： 

一种冬虫夏草发酵液回收孢子半连续培养方法，包括以下步骤： 

(1)准备半连续发酵罐：使用净化蒸汽对空罐、管道、过滤器及阀门在压力为0.1～0.15MPa，温度121～124℃，持续灭菌30～50min； 并将空罐、管道、过滤器以及阀门连接起来； 

(2)培养基准备：将培养基装入步骤1)的空罐之中，装入量为空罐体积容量的50-55％，并在压力为0.12～0.15MPa，温度121～126℃条件下灭菌35-45min；随后，更换无菌风维持压力，启动冷水循环系统进行降温到20～30℃后，接种发酵培养； 

(3)发酵检测：当发酵进行到100-120h后，对发酵罐取样，进行发酵液检测，当分生孢子≥90％的脱落母体孢子梗，孢子梗数量增加不明显时，菌丝培养结束； 

(4)浓缩菌丝体，分离发酵液和孢子：将步骤3)中的含有菌丝体及孢子的培养液，经过过滤器进行过滤处理，获得冬虫夏草的孢子和部分发酵液； 

(5)继续发酵培养：将步骤4)获得的冬虫夏草孢子和纯净的发酵液以及原料液再返回半连续发酵罐中，作为发酵罐的种子，继续进行冬虫夏草的半连续发酵培养。 

较佳的，所述的步骤1)灭菌的压力为0.12～0.13MPa，温度122～123℃，持续时间为40min。 

较佳的，所述的步骤2)灭菌的压力为0.13～0.14MPa，温度为123～124℃，持续时间为40min。 

优选地，所述的步骤2)中采用冷水循环系统降温到25℃。