[发明专利]一种冬虫夏草发酵液回收孢子半连续培养方法

权利要求书

1.一种冬虫夏草发酵液回收孢子半连续培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)准备半连续发酵罐：使用净化蒸汽对空罐、管道、过滤器及阀门在压力为0.1～0.15MPa，温度121～124℃，持续灭菌30～50min；并将空罐、管道、过滤器以及阀门连接起来；

(2)培养基准备：将培养基装入步骤1)的空罐之中，装入量为空罐体积容量的50-55％，并在压力为0.12～0.15MPa，温度121～126℃条件下灭菌35-45min；随后，更换无菌风维持压力，启动冷水循环系统进行降温到20～30℃后，接种发酵培养；

(3)发酵检测：当发酵进行到100-120h后，对发酵罐取样，进行发酵液检测，当分生孢子≥90％的脱落母体孢子梗，孢子梗数量增加不明显时，菌丝培养结束；

(4)浓缩菌丝体，分离发酵液和孢子：将步骤3)中的含有菌丝体及孢子的培养液，经过过滤器进行过滤处理，获得冬虫夏草的孢子和部分发酵液；

(5)继续发酵培养：将步骤4)获得的冬虫夏草孢子和纯净的发酵液以及原料液再返回半连续发酵罐中，作为发酵罐的种子，继续进行冬虫夏草的半连续发酵培养。

2.如权利要求1所述的冬虫夏草发酵液回收孢子半连续培养方法，其特征在于：所述的步骤1)灭菌的压力为0.12～0.13MPa，温度122～123℃，持续时间为40min。

3.如权利要求1所述的冬虫夏草发酵液回收孢子半连续培养方法，其特征在于：所述的步骤2)灭菌的压力为0.13～0.14MPa，温度为123～124℃，持续时间为40min。

4.如权利要求1所述的冬虫夏草发酵液回收孢子半连续培养方法，其特征在于：所述的步骤2)中采用冷水循环系统降温到25℃。

5.如权利要求1所述的冬虫夏草发酵液回收孢子半连续培养方法，其特征在于：所述的步骤2)中培养基的组成为葡萄糖2.0％、蛋白胨4.0％、KH₂PO₄0.20％、MgSO₄0.10％、玉米浆0.15％、糖蜜0.25％、其余为水。

6.如权利要求1所述的冬虫夏草发酵液回收孢子半连续培养方法，其特征在于：所述的步骤3)中发酵检测是当发酵到105～115h后，对发酵罐内的液体取样检测。

7.如权利要求1或6所述的冬虫夏草发酵液回收孢子半连续培养方法，其特征在于：所述的步骤3)中发酵检测是当发酵到110h后，对发酵罐内的液体取样检测。

8.如权利要求1所述的冬虫夏草发酵液回收孢子半连续培养方法，其特征在于：所述步骤4)中经过过滤器进行过滤处理的过滤为膜过滤。

9.如权利要求1或8所述的冬虫夏草发酵液回收孢子半连续培养方法，其特征在于：所述步骤4)中经过过滤器进行过滤处理的过滤为选择性膜过滤。