[发明专利]Mini-X-STR和Amelogenin基因座荧光标记复合扩增试剂盒

说明书

技术领域

本发明公开一种Mini-X-STR和Amelogenin基因座荧光标记复合扩增试剂盒，共包括13个位点的荧光标记快速复合扩增检验，具体是涉及X染色体基因座的五色荧光标记快速复合扩增系统，可以解决祖母-孙女、姐妹或更远的亲缘关系的亲权鉴定，以及疑难降解生物检材等方面实际办案的需要。

背景技术

在人类的23对染色体中，其中一对为性染色体即X和Y染色体。在正常的体细胞中，女性有一对X染色体，核型为46XX；而男性只有一条X染色体，以半合子的状态存在，核型为46XY。性染色体在减数分裂中，与常染体一样，同样会发生分离，分配到配子中，在受精卵中又组合成XX或XY染色体对。含XX染色体的受精卵发育成女孩，含XY染色体的受精卵发育男孩。

女性的一对X染色体在卵子的生成过程中可以像常染色体那样发生互换和重组。但是在男性个体生成精子的过程中，X和Y染色体并不能随意互换和重组。非重组区的基因以性连锁的方式遗传。X染色体特异性的基因以X连锁的方式遗传，即X连锁遗传。父亲的X染色体基因只遗传且必须遗传给女儿，而母亲的X染色体基因既可以遗传给女儿也可以遗传给儿子。X染色体这种独特的遗传方式，使得X染色体的遗传标记在亲权鉴定中具有特殊的应用价值，在一些缺失双亲的鉴定中，如姐妹的认定，更是有着常染色体遗传标记难以比拟的优点。

随着STR复合扩技术的发展，X染色体STR的复合扩增也在发展。从最初的复合扩增银染法到荧光标记引物复合扩增，现在已报道最多可以同时复合扩增17、19个X-STR。并且国外有了检测X-STR的复合扩增的商品化试剂盒，其最多可以复合扩增12个X-STR(http://www.biotype.de/fileadmin/user/Flyer/Mentype_ArgusX-12.pdf)。国内也出现了基点认知17个X-STR。但Qiagen的ArgusX-12最大扩增子在375bp不适于降解检材的分型，且无法做到法医对快速的要求。基点认知最大片段达到330bp，且无法做到快速检测。

随着STR技术在法庭科学中的逐渐广泛应用，越来越多的微量疑难生物检材(如各类接触性脱落细胞、汗斑、)被提取送检要求进行DNA检验，这些疑难检材往往存在量微、腐败降解或含有较多抑制因素的等问题，采用常规的STR技术检验，尤其是大片段的基因座，经常不能扩增成功。本发明建立的mini-STR基因座位复合扩增体系，所有基因座扩增片段均不大于236bp，其中DXS7423基因座扩增片段为187-207bp，DXS10162基因座扩增片段为196-236bp，其余10个基因座扩增片段均不大于205bp，因此可以在一定程度上克服微量、因降解导致的小片段检材、含扩增抑制剂等常见难题，容易扩增成功，从而提高困难生物检材的检验成功率。

目前的STR分型技术，往往包括样本检材的DNA提取、PCR扩增和分型检测三项主要操作步骤，获得一个样本的最终分型结果往往需要8个小时以上。缩短样本DNA检验时间，在实际检案中将有利于快速锁定犯罪嫌疑人，或排除无辜人员，在案件侦破过程中具有重要意义，是法庭科学DNA分型技术发展的必然方向。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是X-STR基因座检测过程中检测时间时、扩增片段大、在小片段检材上检测效果不好，提供了一种Mini-X-STR和Amelogenin基因座荧光标记复合扩增试剂盒。

技术方案：

Mini-X-STR和Amelogenin基因座荧光标记扩增试剂盒，包括有用于扩增如下13个基因座的引物：DXS7133、DXS8378、DXS981、DXS7424、DXS6789、DXS10159、GATA165B12、DXS101、DXS7423、GATA31E08、DXS10164、DXS10162、Amelogenin。

上述的引物以及引物在扩增体系中优选浓度如表1所示：

表1优选引物序列以及其在扩增体系中的优选浓度

进一步地，上述的试剂盒中的引物是在同一个扩增体系中进行复合扩增的。

进一步地，试剂盒的扩增体系的组成如表2所示：

表2