[发明专利]一种检测蒿乙醚含量和有关物质的高效液相色谱法

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定蒿乙醚含量及有关物质的高效液相色谱法，属于药物分析领域。

背景技术

蒿乙醚(结构式见附图1)是一种衍生自黄花蒿的抗疟化合物。分子式：C₁₇H₂₈O₅，白色结晶或结晶性粉末。蒿乙醚为二氢青蒿素的乙醚衍生物，其已经进行了广泛的临床前、动物和毒理学研究以及为药物调控，目前已被证实具有前景的活性，并且蒿乙醚可治疗无并发症的疟疾，有严重并发症的疟疾、脑疟疾和多药性疟疾。而且蒿乙醚比青蒿素更有效，其表现出清除率更快的杀裂繁体作用、没有副作用的短的发热清除时间和低的复发率，对疟原虫无性体有较强的杀灭作用，能迅速控制症状。世界卫生组织(WHO)也已经将蒿乙醚作为治疗生命的抗疟药物。但是对于蒿乙醚原料药中蒿乙醚含量及有关物质的测定目前却少有研究，《国际药典》2011版对蒿乙醚的含量和相关物质的测定是采用高效液相色谱法，色谱条件里的波长为210nm，流动相选用乙腈-水(62:38)等度洗脱。就国际药典检测蒿乙醚含量和相关杂质的方法中，等度洗脱不能完全分离蒿乙醚原料中的有关物质，对于蒿乙醚纯度和有关物质的含量检测存在误差，并且该检测方法使蒿乙醚样品的色谱峰存在拖尾现象，拖尾因子T＝1.2不符合中国药典2010版规定的T＝0.95～1.05。为了解决上述问题本发明提供的检测方法是采用乙腈-水为流动相进行梯度洗脱，建立一种新的蒿乙醚原料药中蒿乙醚含量和有关物质的检测方法，该检测方法使色谱峰分离效果很好，分离度大于1.5符合中国药典2010版标准，并且色谱峰无拖尾现象，拖尾因子T＝0.98符合中国药典2010版的规定。所以该检测方法对蒿乙醚原料药的质量控制和杂质分析具有重要的应用价值。

发明内容

本发明经多次精密试验提供一种更准确、高效的测定蒿乙醚含量和有关物质的高效液相色谱法，用于蒿乙醚原料药的质量控制。为达到目的，本发明采用了如下技术方案：

本发明的一个具体的实施例中，本发明采用Agilent高效液相色谱仪测定蒿乙醚含量和有关物质，其选用十八烷基键合硅胶色谱柱，以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱。

本发明又一个具体的实施例中，十八烷基键合硅胶色谱填料颗粒度为3-5μm，优选4.6μm，色谱柱的长度为150mm或250mm，优选250mm。

本发明再一个具体的实施例中，所述乙腈-水梯度洗脱的体积比为70％：30％(0min)，70％：30％(25min)，85％：15％(35min)，70％：30％(45min)。

本发明再一个具体的实施例中，利用DAD检测器进行190nm--400nm全波长扫描(图谱见图5)，结果蒿乙醚在190-250nm范围处有较大吸收，最大吸收波长为216nm，此波长下蒿乙醚的相关物质也有较好的吸收，因此选择216nm作为蒿乙醚含量和有关物质测定的检测波长。

本发明再一个具体的实施例中，利用标准品溶液多次进样来确定进样量，进样精密度试验次数为6次，所得最佳进样量为20μl。

本发明还一个具体的实施例中，所述流动相的流速为0.5-1.2ml/min，优选1ml/min，其特点在于选用上述流速所得蒿乙醚样品有很好分离，样品分离度均大于1.5，符合中国药典2010版的规定。

本发明提供的一种HPLC法测定蒿乙醚有关物质的方法，其包括以下步骤：

标准品溶液配制：取蒿乙醚标准品适量，用乙腈溶解并定容，配制成蒿乙醚浓度为5mg/ml的标准品溶液。

供试品溶液配制：取蒿乙醚原料药适量，用乙腈溶解并定容，配制成蒿乙醚浓度为5mg/ml的供试品溶液。

对照品溶液配制：取上述蒿乙醚标准品溶液1ml置于200ml容量瓶，用乙腈稀释至定容，配制成蒿乙醚浓度为0.025mg/ml对照品溶液。

附图说明

图1为蒿乙醚结构式

图2为蒿乙醚供试品液相色谱图

图3为蒿乙醚标准品液相色谱图

图4为蒿乙醚对照品液相色谱图

图5为蒿乙醚检测波长扫描图谱

具体实施方式

色谱条件：

采用Agilent高效液相色谱仪，用色谱柱C₁₈(4.6x250mm 5μm)，以乙腈-水梯度洗脱，洗脱体积比为70％：30％(0min)，70％：30％(25min)，85％：15％(35min)，70％：30％(45min)，检测器为DAD检测器，检测波长216nm，流速为1ml/min，进样量为20μl。