[发明专利]柑桔中痕量农药残留的表面增强拉曼光谱快速检测方法

权利要求书

1.柑桔中痕量农药残留的表面增强拉曼光谱快速检测方法，其特征在于按照下述步骤进行：

(1)银纳米或金纳米增强基底的制备：采用柠檬酸三钠加热还原法制备得到；

(2)建立各种农药标准品的表面增强拉曼谱图，并对其谱峰进行归属和解析；

(3)待测柑桔样品经捣碎后，萃取出样品溶液，萃取液为黄色；

(4)采用无水硫酸镁、N-丙基乙二胺、C₁₈和石墨化碳对上述萃取液进行净化，去除萃取液中有机酸、色素等荧光物质对拉曼检测效果的影响；萃取液经净化后，由黄色变成无色；净化后的溶液过0.22μm有机滤膜；

(5)取步骤(4)的20μL待测过滤液、步骤(1)制备的500μL增强基底溶液和100μL氯化钠溶液(质量浓度为1％)混合均匀，用于拉曼光谱检测；

(6)以化学方法检测柑桔中不含农药残留的柑桔为空白样品，空白样品经捣碎后，由步骤(3)提取和步骤(4)净化，配制以空白柑桔提取液为基质的不同浓度的农药标准溶液，过0.22μm有机滤膜；取20μL待测过滤液、步骤(1)制备的500μL增强基底溶液和100μL质量浓度为1％氯化钠溶液混合均匀，用于拉曼光谱检测；

(7)将步骤(5)所得的待测试样的SERS谱图与步骤(2)所归属的农药拉曼谱峰进行对比，便可确定待测试样中是否含有该种农药，即达到对待测柑桔试样中是否含有农药残留定性判别的目的；

(8)将步骤(6)所测得的待测柑桔试样的SERS谱图与步骤(2)所归属的农药拉曼谱峰进行对比，选择拉曼峰强度较高的农药特征峰用于柑桔中农药残留的定量分析；以农药浓度为横坐标，特征峰的峰强度为纵坐标绘制标准曲线，用于柑桔样品中农药残留的定量分析。

2.根据权利要求1所述的柑桔中痕量农药残留的表面增强拉曼光谱快速检测方法，其特征在于其中步骤(1)银纳米或金纳米增强基底的制备：银纳米增强基底采用柠檬酸三钠加热还原法制备得到，按照下述步骤进行：将一定浓度的硝酸银溶液(36mg硝酸银溶于200mL超纯水)倒入烧瓶中，放在恒温磁力搅拌器上，高温迅速加热到沸腾，在2分钟内逐步滴入浓度为1％的柠檬酸三钠溶液(60mg柠檬酸三钠溶于6mL超纯水)，同时以200r/min的转速搅拌，此时溶液慢慢由透明变淡棕色，反应25min后得到灰绿色液体；待室温冷却后，将上述适量银胶溶液倒入离心管中，离心后倒掉少量上清液，再往离心管中加入适量超纯水，用超声振荡混匀，银胶经多次提纯后，避光保存；

金纳米增强基底采用柠檬酸三钠加热还原法制备得到，按照下述步骤进行：将一定浓度的高氯金酸溶液(10mg高氯金酸溶于100mL超纯水中)倒入三口烧瓶中，放在恒温磁力搅拌器上，温度控制在120℃恒定加热至沸腾后，迅速加入一定浓度的柠檬酸三钠溶液(20mg柠檬酸三钠溶于4mL超纯水)，同时以100r/min的转速快速搅拌；制备的金溶胶颜色为酒红色；待溶液冷却后，避光保存。

3.根据权利要求1所述的柑桔中痕量农药残留的表面增强拉曼光谱快速检测方法，其特征在于其中步骤(2)建立各种农药标准品的表面增强拉曼谱图，并对其进行谱峰归属和解析；按照下述步骤进行：称取20mg农药标准品，放于200mL的容量瓶中，用有机溶剂定容到刻度，用超声振荡溶解，制成浓度为100mg/L的标准品母液；将母液稀释成一定浓度的标准溶液，取稀释的标准溶液20μL、步骤(1)制备的500μL增强基底溶液和100μL质量浓度为1％氯化钠溶液混合均匀，用于拉曼光谱检测，对农药分子的官能团特征振动频率进行谱峰归属和解析，得到各农药分子的特征谱峰，这些特征谱峰作为柑桔中该农药残留的定性定量判别依据。

4.根据权利要求1所述的柑桔中痕量农药残留的表面增强拉曼光谱快速检测方法，其特征在于所述步骤(3)的萃取方法为：待测柑桔样品经捣碎后，称取10g捣碎样品放于50mL离心管中，向离心管中依次加入10mL乙腈、4g无水硫酸镁和1g氯化钠，摇匀后在涡旋混合器上以400r/min的转速涡旋混合2min，再将此离心管放入离心机中，以4200r/min的转速离心5min，此时上清液为黄色。

5.根据权利要求1所述的柑桔中痕量农药残留的表面增强拉曼光谱快速检测方法，其特征在于所述步骤(4)的净化方法为：在15mL离心管中，分别加入600mg无水硫酸镁、60mg N-丙基乙二胺、60mg C₁₈和20mg石墨化碳，取步骤(3)的4mL萃取液加入此离心管中，摇匀后在400r/min的涡旋混合器上混合2min后，再将此离心管放入离心机以4200r/min的转速离心5min，得到无色上清液。