[发明专利]一种利于皮肤或粘膜吸收的鹿茸多肽系列提取方法

说明书

技术领域

本发明提供一种利于皮肤或粘膜吸收的鹿茸多肽系列提取方法，属于生物技术提取技术领域。

背景技术

鹿茸生长迅速(生长速度为1～2 cm/d），并且具有再生特点，是天然的细胞生长因子库。随着对鹿茸研究的深入，人们已开始重视对鹿茸中具有生物活性的多肽、蛋白质即生长因子的开发利用。中国专利CN 100339387C公布了采用pH3.5酸解后40-60%乙醇浸提多肽的工艺，获得了4%提取率的500 000 Da以下的提取物，但在实际应用中，发现该提取物在pH3.5酸性溶液中易于溶解，却不易溶解于中性或碱性溶液中。皮肤可承受的pH范围为5.5-7.5，而以上制备方法获得的产物在此pH范围内多为难溶或溶解后易于产生沉淀，同时，高浓度的乙醇不仅大大增加了处理体积，还引入了有机溶剂污染，增加了对皮肤的刺激，极大的限制了该制品作为化妆品原料或应用于皮肤外用制剂。中国专利CN 101068556 B采用水浸提鹿茸，制得了提取率为4.42%的500-500 000 Da的水溶性提取物，虽然该技术解决了溶解性的问题，但以上两个专利制备的多肽中绝大部分为不易被皮肤吸收的分子量大于1 000 Da的分子，而其中易于被皮肤吸收的1 000 Da以下的多肽仅占其中的1%以下。2011年，广州皇莎化妆品有限公司（申请号：102225967 A）提出了采用pH7.2缓冲液粗提后50-75%乙醇浸提的策略，文内未提及制备的多肽分子量范围、提取率及溶解性，经过实验检测，发现乙醇醇沉获得的多肽仍然存在难稳定溶解于中性溶剂和分子量分布广泛等限制于其应用于皮肤的弊端。霍玉书（CN 1104095 A）采用pH5-9的条件浸提鹿茸多肽，超滤精制获得分子量5 000-50 000Da的鹿茸生长因子，该制品溶解性好，广泛应用于医药领域，但其制品的分子量范围却严重限制了其在皮肤外用中的有效利用率。此外，专利CN 1481814A公布了酸溶性冻干鹿茸提取物的提取方法，专利CN 1425387A 公布了pH1-3的酸解提取方法，专利CN101554473A经强电场萃取制得含IGF-1的鹿茸多肽，存在在中性溶液中溶解性不好，有机溶剂污染等弊端。

鹿茸多肽的酶解制品，新近才见报道，中国专利CN 102286561 A采用碱性蛋白酶在pH9-12 65℃条件下降解6 h，之后95℃ 15 min灭酶，该酶解条件剧烈，极大的损失了不耐热的成分。在后续的精制中，将该制品溶解于pH2-5的溶液中，强酸性阳离子交换树脂浸泡18-20 h，溶剂pH的反差巨大，损失了大部分鹿茸多肽的酶解产物。中国专利 CN 103169942 A公布了一种制备鹿茸胶原蛋白的酶解方法，pH6-8，20-35℃条件下，采用复合生物催化剂水解获得了澄清金黄色鹿茸水解液，但未进行制品的超滤精制，制品中仍存留有未水解充分的大分子物质，严重影响了其透皮吸收的有效利用。

以上等专利技术所用的方法均为一次性提取，未能充分利用原料，剩余原料残渣中仍然含有大量多肽类生长因子，造成资源的极度浪费。关于鹿茸活性成分的系列提取，仅见专利CN 1771993 A，采用的是超临界CO₂萃取鹿茸中脂溶性成分，该技术重点解决的是鹿茸蛋白质和肽类以外的活性成分的制备。

发明内容

本发明公开一种利于皮肤或粘膜吸收的鹿茸多肽系列提取方法，采用弱酸溶液浸提鹿茸多肽，鹿茸粉碎的残渣及酸提取多肽的全部副产物利用中性蛋白酶酶解，分级超滤制备分子量低于1 000 Da的酸解多肽和酶解多肽，制品有利于皮肤或粘膜的吸收，并避免了残留的强酸或醇对皮肤的刺激。

本发明所述的一种利于皮肤或粘膜吸收的鹿茸多肽系列提取方法，其技术解决方案如下：

1）材料预处理：

新鲜或冰鲜鹿茸称重、切片；

2）提取：

加入预冷的10~30倍体积pH 4.2~4.8的醋酸—醋酸钠水溶液，置于4 ℃环境下搅拌提取4~8h，100~1 000目滤布粗滤，取上清液即为酸解多肽粗提取液，滤渣用于后续的酶解提取；

3）将步骤2）制得的酸解多肽粗提取液分级超滤精制：1 μm滤膜粗滤（浓缩液用于后续的酶解提取），滤液经10 000Da滤膜超滤（浓缩液用于后续的酶解提取），滤液进行300 Da纳滤浓缩；

4）合并步骤2）的滤渣，步骤3的1 μm滤膜和10 000Da滤膜超滤浓缩液，测得体积和浓度，计算质量；