[发明专利]一种直接测定冬虫夏草产品中冬虫夏草多糖肽含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于食品检验与分析领域，具体为一种采用HPLC-PDA法准确、快速地测定冬虫夏草产品中冬虫夏草多糖肽含量的方法。

背景技术

冬虫夏草(学名：Ophiocordyceps sinensis)，又名中华虫草，是中国历史中传统的名贵中药材，主要产于中国大陆青海、西藏、四川、云南、甘肃和贵州等省及自治区的高寒地带和雪山草原。现代医学证明冬虫夏草具有镇静、止咳化痰和抑制肿瘤细胞生长、增加机体对健身防病有着特有免疫的功效，冬虫夏草多糖肽就是其中的主要功效成分之一。冬虫夏草多糖肽是一种糖蛋白，是多糖与蛋白质的结合体，具有很高的分子量，由双糖的重复单元组成。冬虫夏草多糖肽具有很强生物活性，初步研究多糖肽能增强机体免疫功能，具有抗肿瘤作用和抗氧化作用。但是，目前还未见对冬虫夏草产品中冬虫夏草多糖肽快速、准确、易普及的检测方法的记载。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种直接测定冬虫夏草产品中冬虫夏草多糖肽含量的方法，其采用的技术方案如下：

一种直接测定冬虫夏草产品中冬虫夏草多糖肽含量的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

(一)样品处理

称取冬虫夏草产品适量，加水后进行水浴提取，待其冷却后，加水定容成浓度为5.00mg/ml的冬虫夏草产品水溶液，过滤该溶液，取部分滤液加无水乙醇后通过离心机离心，然后取沉淀物采用流动相溶解，过有机滤膜后得样品溶液备用；

(二)高效液相色谱仪的测定

将步骤(一)所得样品溶液取适量加入到高效液相色谱仪中进行测定，并对测定结果进行定性分析；

(三)标准曲线的制定

精密称取干燥至恒重的冬虫夏草多糖肽标准品0.0500g于10ml容量瓶中，用水溶解并定容，得浓度为5.00mg/ml的冬虫夏草多糖肽标准备用液，然后分别取100μl、200μl、300μl、400μl、500μl标准备用液于5ml容量瓶中，加水定容，得到浓度分别为100.0μg/ml、200.0μg/ml、300.0μg/ml、400.0μg/ml、500.0μg/ml的标准工作液，将标准工作液通过高效液相色谱仪进行测定，所得数据以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，建立浓度-峰面积标准曲线，并得出标准方程。

(四)样品中冬虫夏草多糖肽含量的确定

根据浓度-峰面积标准曲线得出的线性方程，将步骤(二)中样品溶液里所测得的冬虫夏草多糖肽的峰面积换算为浓度，从而计算出该冬虫夏草产品中的冬虫夏草多糖肽含量。

进一步地，高效液相色谱仪测定时，液相色谱条件为：色谱柱为Atlantis T3色谱柱，其规格为4.6×250mm、i.d..5μm，柱温为35℃，流动相为体积分数为5％的甲醇水溶液，流速为1ml/min，进样量为10μl，检测器为二极管阵列检测器，扫描波长为190nm—460nm。

进一步地，所述水浴提取的温度为60℃，时间为30分钟。

进一步地，所用离心机的转速为9000rpm，离心时间为15分钟。

进一步地，所用有机滤膜为0.22μm有机滤膜。

进一步地，所述冬虫夏草产品包括冬虫夏草药材原料和冬虫夏草保健食品。

通过上述技术方案的实现，本发明提供了一种准确、简便、快速、易普及的测定冬虫夏草产品中冬虫夏草多糖肽的方法，本发明通过高效液相色谱二极管阵列检测器对样品进行定性与定量分析，前处理简单便捷，无需繁琐提取分离等除杂技术，为冬虫夏草产品中冬虫夏草多糖肽功效因子的鉴别分析、品质评价以及质量控制提供了有效途径和可靠方法。

附图说明

图1为本发明中冬虫夏草多糖肽标准品的色谱图；

图2为本发明中冬虫夏草多糖肽标准品的光谱图；

图3为样品中冬虫夏草多糖肽的色谱图；

图4为样品中冬虫夏草多糖肽的光谱图；

图5为冬虫夏草多糖肽的浓度-峰面积标准曲线。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做更详细的描述。

实施例1

采用本发明所提供方法对青海佳兑冬虫夏草纯粉样品中的冬虫夏草多糖肽进行测定。

1、测定所采用的仪器及药品有：Waterse2695型高效液相色谱仪系统，Waterse2996型二极管阵列检测器，Empower色谱工作站及数据处理系统；冬虫夏草多糖肽标准品(＞98％，国家菌草工程技术研究中心)；

2、测定步骤如下：

(一)样品处理