[发明专利]一种超氧化物歧化酶的生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及超氧化物歧化酶制作方法，具体涉及利用大蒜进行一种超氧化物歧化酶的生产方法。

背景技术

超氧物歧化酶(Superoxide Dismutase简称SOD)是一种新型酶制剂。它在生物界的分布极广，几乎从动物到植物，甚至从人到单细胞生物，都有它的存在。SOD被视为生命科技中最具神奇魔力的酶、人体内的垃圾清道夫。SOD是氧自由基的自然天敌，是机体内氧自由基的头号杀手，是生命健康之本。目前的超氧物歧化酶的制法由于工艺的粗糙，SOD的收集比例较低，造成大量的浪费。

发明内容

本发明的目的是提供一种超氧化物歧化酶的生产方法，解决上述现有技术中一个或者多个问题。

根据本发明的一个方面，提供了一种超氧化物歧化酶的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、大蒜分瓣并切蒂，用30～45℃的水浸泡清洗、去皮，烘干备用；

S2、将烘干的大蒜榨汁，并加入石英砂研磨；

S3、将破碎的大蒜用2-5℃的0.5mol/L氯化钠溶液中浸泡8-15个小时，用离心机去除杂质，制成超氧化物歧化酶原液。

在一些实施方式中，还包括S3后的如下步骤：

S4、将超氧化物歧化酶原液采用热变性、等电点沉淀和丙酮分级沉淀结合的方法进行提纯；

S5、将提纯超氧化物歧化酶原液进行柱层析分离纯化。

本发明收集率可达到80％以上，超氧化物歧化酶比活达到100μ/mg,而传统法只能达到50％，比活仅有60μ/mg。

具体实施方式

实施例1：

本发明提供了一种超氧化物歧化酶的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、大蒜分瓣并切蒂，用30℃的水浸泡清洗、去皮，烘干备用；

S2、将烘干的大蒜榨汁，并加入石英砂研磨，以达到破损大蒜细胞壁的作用；

S3、将破碎的大蒜用2℃的0.5mol/L氯化钠溶液中浸泡8个小时，用离心机去除杂质，制成超氧化物歧化酶原液。

S4、将超氧化物歧化酶原液采用热变性、等电点沉淀和丙酮分级沉淀结合的方法进行提纯，去除其中大部分杂蛋白质，可得到10倍以上的纯化效果，具体操作将超氧化物歧化酶原液先在60℃温度下20min，然后调等电点至pH3.0，左后加入1.0％体积分量的丙酮沉淀，离心杂质，收集纯化液；

S5、将提纯超氧化物歧化酶原液进行柱层析分离纯化，将上述纯化液再加入4.0％体积分量的丙酮，使超氧化物歧化酶全部沉淀下来，利用离心机收集沉淀物，将其置于缓冲洗液中，进行柱层析分离纯化，得到超氧化物歧化酶成品。

本发明收集率达到78％，超氧化物歧化酶比活达到92μ/mg。

实施例2：

本发明提供了一种超氧化物歧化酶的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、大蒜分瓣并切蒂，用37℃的水浸泡清洗、去皮，烘干备用；

S2、将烘干的大蒜榨汁，并加入石英砂研磨，以达到破损大蒜细胞壁的作用；

S3、将破碎的大蒜用3℃的0.5mol/L氯化钠溶液中浸泡12个小时，用离心机去除杂质，制成超氧化物歧化酶原液。

S4、将超氧化物歧化酶原液采用热变性、等电点沉淀和丙酮分级沉淀结合的方法进行提纯，去除其中大部分杂蛋白质，可得到10倍以上的纯化效果，具体操作将超氧化物歧化酶原液先在60℃温度下20min，然后调等电点至pH3.5，左后加入1.0％体积分量的丙酮沉淀，离心杂质，收集纯化液；

S5、将提纯超氧化物歧化酶原液进行柱层析分离纯化，将上述纯化液再加入4.0％体积分量的丙酮，使超氧化物歧化酶全部沉淀下来，利用离心机收集沉淀物，将其置于缓冲洗液中，进行柱层析分离纯化，得到超氧化物歧化酶成品。

本发明收集率达到79％，超氧化物歧化酶比活达到95μ/mg。

实施例3：

本发明提供了一种超氧化物歧化酶的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、大蒜分瓣并切蒂，用45℃的水浸泡清洗、去皮，烘干备用；

S2、将烘干的大蒜榨汁，并加入石英砂研磨，以达到破损大蒜细胞壁的作用；

S3、将破碎的大蒜用5℃的0.5mol/L氯化钠溶液中浸泡15个小时，用离心机去除杂质，制成超氧化物歧化酶原液。