[发明专利]一种筛选κ阿片受体激动剂的细胞模型及筛选方法

权利要求书

1.一种细胞，其保藏编号为CGMCC No.9002，保藏日期2014年3月26日，保藏单位是中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

2.一种筛选κ阿片受体激动剂或者腺苷酸环化酶抑制剂的方法，或者一种评估/测定待测样品对κ阿片受体的激动活性或者对腺苷酸环化酶抑制活性或者细胞毒性的方法，包括使用权利要求1所述的细胞的步骤。

3.根据权利要求2所述的方法，其包括下述步骤：

在加入待测样品之后或同时加入腺苷酸环化酶激动剂，检测PKA发生重分布的程度。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，以相同培养条件但是只加入腺苷酸环化酶激动剂的细胞作为对照细胞。

5.根据权利要求3所述的方法，其中，所述腺苷酸环化酶激动剂为氟化钠或forskolin。

6.根据权利要求3所述的方法，其中，所述腺苷酸环化酶激动剂在待测样品加入之后间隔1－60分钟加入。

7.根据权利要求3所述的方法，其中，所述腺苷酸环化酶激动剂在待测样品加入之后间隔10－50分钟加入。

8.根据权利要求3所述的方法，其中，所述腺苷酸环化酶激动剂在待测样品加入之后间隔20－40分钟加入。

9.根据权利要求3所述的方法，其中，在加入腺苷酸环化酶激动剂之后的1－20分钟后检测PKA发生重分布的程度。

10.根据权利要求3所述的方法，其中，在加入腺苷酸环化酶激动剂之后的1－15分钟后检测PKA发生重分布的程度。

11.根据权利要求3所述的方法，其中，在加入腺苷酸环化酶激动剂之后的1－10分钟后检测PKA发生重分布的程度。

12.根据权利要求3所述的方法，其中，所述腺苷酸环化酶激动剂的终浓度为1－100μmol/L。

13.根据权利要求3所述的方法，其中，所述腺苷酸环化酶激动剂的终浓度为1－50μmol/L。

14.根据权利要求3所述的方法，其中，所述腺苷酸环化酶激动剂的终浓度为1－20μmol/L。

15.根据权利要求3所述的方法，其包括下述步骤：

1)将权利要求1所述的细胞接种并进行培养；

2)弃培养基，并用无血清的培养基进行清洗细胞至少1次；

3)加入待测样品，在无血清的培养基中培养；

4)加入forskolin，在无血清培养基中继续培养；

5)检测PKA的重分布程度。

16.根据权利要求15所述的方法，其中，步骤1)中所述的接种密度为0.6×10⁴－2.0×10⁴个/mL，培养时间为12－48小时。

17.根据权利要求16所述的方法，其中，步骤1)中所述的培养时间为24小时。

18.根据权利要求15所述的方法，其中，步骤1)、3)或4)中的培养条件为37℃、5％CO₂、95％湿度。

19.根据权利要求15所述的方法，其中，步骤2)、3)或4)中的无血清培养基为F12。