[发明专利]一种长循环和靶向协同的多功能抗肿瘤靶向纳米药物载体

权利要求书

1.一种长循环和靶向协同的多功能抗肿瘤靶向纳米药物载体，其特征在于：由粒径为30-200 nm且均匀分布的复合胶束组成，所述复合胶束由两种双亲性嵌段共聚物通过在水溶液中自组装形成，其中一种双亲性嵌段共聚物为聚乙二醇-b-聚环己内酯（PEG-b-PCL），其亲水端为聚乙二醇（PEG）、疏水端为聚环己内酯（PCL），另一种双亲性嵌段共聚物为聚环己内酯-b-聚β氨酯-c(RGDfK)[（PCL-b-PAE-c(RGDfK)]，式中c(RGDfK)为短链环肽[其氨基酸序列为cyclo(Arg-Gly-Asp-d-Phe-Lys)]，其亲水端为带有靶向基团修饰且具有pH响应的端基为c(RGDfK)的聚β氨酯[PAE-c(RGDfK)]、疏水端亦为聚环己内酯（PCL），上述两种双亲性嵌段共聚物的疏水端的分子量为2-10 kDa（千道尔顿）且相差＜5 kDa；所述复合胶束在pH 7.4水溶液中为核-壳结构，其中核为疏水端聚环己内酯（PCL），壳层为聚乙二醇（PEG）和PAE-c(RGDfK)的复合壳层。

2.一种如权利要求1所述长循环和靶向协同的多功能抗肿瘤靶向纳米药物载体的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

1）聚乙二醇-b-聚环己内酯（PEG_2k-b-PCL）的合成

以端羟基聚乙二醇（CH₃O-PEG₄₅-OH）为引发剂，以辛酸亚锡[Sn(Oct)₂]为催化剂，以ε-己内酯（ε-CL）为单体，开环聚合制备，具体方法是：将干燥处理过的端羟基聚乙二醇和减蒸处理过的ε-CL溶于重蒸过的无水甲苯中，加入Sn(Oct)₂，依次进行液氮冷冻、抽真空、通氮气、解冻，重复三次，110 °C油浴中反应12 h，反应后旋蒸除去甲苯，加入二氯甲烷溶解粘稠物后，在冰乙醚中沉淀，抽滤洗涤后，将固体产物置于真空烘箱中干燥，即可得到白色固体聚乙二醇-b-聚环己内酯（PEG_2k-b-PCL）；

2）聚环己内酯-b-聚β氨酯-c(RGDfK)[ PCL-b-PAE-c(RGDfK)]的合成

利用开环聚合和迈克尔加成反应通过连续反应制备，具体方法是：将叔丁氧羰基氨基乙醇（BOC-NH-C₂H₄OH）和减蒸过的ε-己内酯（ε-CL）混合，加入重蒸过的甲苯溶解，加入辛酸亚锡[Sn(Oct)₂]，依次进行液氮冷冻、抽真空、通氮气、解冻，重复三次，然后在110 °C油浴中反应12 h，反应后旋蒸除去甲苯，加入二氯甲烷溶解粘稠物后，在冰乙醚中沉淀，抽滤洗涤后，将固体产物置于真空烘箱中干燥，得到PCL的均聚物PCL-OH；

将上述PCL-OH、三乙胺（TEA）和重蒸后的二氯甲烷混合均匀得到混合液a，然后将丙烯酰氯溶解于重蒸后的二氯甲烷中，混合均匀得到混合液b，将混合液b在氩气氛围下逐滴缓慢滴入到混合液a中，滴加完毕后封闭反应体系，缓慢升至室温，在氩气氛围下反应12 h后，萃取反应液，用饱和碳酸钠溶液、0.1 mol/L的盐酸溶液和纯水分别洗涤至少三次，取有机相，用无水硫酸镁干燥8-10 h，抽滤，旋蒸浓缩后在冰乙醚中沉淀，静置8-10 h后抽滤，用无水乙醚洗涤后，将固体置于真空烘箱中干燥，即可制得端基碳碳双键功能化的PCL-A；

将上述PCL-A、 己烷-1,6-二醇-二丙烯酸酯（HDD）和4,4′-三亚甲基-二哌啶（TDP）混合后，加入氯仿溶解，55 °C油浴中反应，72 h后，在反应液中加入N-丙烯酰氧琥珀酰亚胺（NAS），继续反应12 h，封端并终止反应，即可得到黄色固体PCL-b-PAE-NAS；

将上述PCL-b-PAE-NAS和短链环肽[c(RGDfK)]混合后，加入DMF和氯仿的混合溶剂，然后加入三乙胺（TEA），30 °C下搅拌反应8-10h，反应液旋蒸除去氯仿，在超纯水中透析，透析袋截留分子量为12-14k Da，每天换水四次，透析三天后，冷冻干燥，即可制得聚环己内酯-b-聚β氨酯-c(RGDfK)[ PCL-b-PAE-c(RGDfK)]；

3）室温下分别将步骤1）和2）中所得到的两种嵌段共聚物PCL-b-PAE-c(RGDfK)和PEG-b-PCL分别溶解在有机溶剂氯仿中，得到两种聚合物溶液，这两种溶液的浓度均为2 mg/mL；另外将阿霉素盐酸盐加入到氯仿中，再加入三乙胺中和阿霉素盐酸盐中的盐酸，制得浓度为2 mg/mL的阿霉素溶液；

4）将步骤3）中制备得到的两种聚合物溶液和阿霉素溶液按照体积比为1：1：1均匀混合，得到混合溶液；

5）将上述混合溶液在超声搅拌下逐滴加入到pH 为4.0、浓度为10^-4 mol/L的盐酸中，滴加完全后，在35 °C下剧烈搅拌挥发至有机溶剂基本挥发完全，然后在室温下旋蒸至完全除去未挥发干净的有机溶剂，加入浓度为0.1 mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至7.4，在超纯水中透析，所用透析袋截留分子量为12-14 kDa，透析两天后，经超滤离心浓缩，即可制得所需浓度的负载阿霉素的纳米药物载体（载药胶束RMSM-DOX）。