[发明专利]肿瘤ABL1基因位点分型检测试剂盒、使用方法及应用

权利要求书

1.肿瘤ABL1基因位点分型检测试剂盒，其特征在于，该检测试剂盒包括：PCR试剂和LDR试剂，所述的PCR试剂包括一对PCR正向引物和反向引物、双蒸水、聚合酶、聚合酶配套缓冲液、dNTP和MgCl₂；

所述正向引物如SEQ ID NO.2所示:5’-CACCATGGAGGTGGAAGAGT-3’；

所述反向引物如SEQ ID NO.3所示:5’-TCTGAGTGGCCATGTACAGC-3’。

2.根据权利要求1所述的肿瘤ABL1基因位点分型检测试剂盒，其特征在于，所述LDR试剂包括相关位点的荧光探针、检测探针、双蒸水、Taq连接酶和连接酶配套缓冲液；所述聚合酶为Taq酶。

3.根据权利要求2所述的肿瘤ABL1基因位点分型检测试剂盒，其特征在于，所述LDR所用荧光探针序列为：

5’-P-TGAGTTCATGACCTACGGGAACCTCTACCTACCTACCTACC-FAM-3’；所述LDR所用检测探针序列为：如SEQ ID NO.5所示5’-ACCTACCTACCTACCCGGGAGCCCCCGTTCTATATCATCAC-3’和如SEQ ID NO.6所示5’-CTACCTACCTACCTACCCGGGAGCCCCCGTTCTATATCATCAT-3’，所述连接产物长度分别为82和84。

4.根据权利要求1所述的肿瘤ABL1基因位点分型检测试剂盒，其特征在于，所述荧光标记的一部分为和模板配对部分，另一部分则可引入随机系列来调整LDR产物长度，所述荧光探针在3’进行荧光标记和5’端进行磷酸化标记；所述荧光探针的荧光基团为5-FAM、6-FAM、TAMRA、HEX、TET、JOE、VIC、NED、ROX、D1、D2、D3或D4。

5.根据权利要求2所述的ABL1基因位点分型检测试剂盒，其特征在于，所述检测探针的一部分为和模板配对部分，另一部分则可引入随机系列来调整LDR产物长度，所述检测探针根据突变位点的需要进行设计，检测探针为2-4根探针，检测探针中的3’端为检测位点。

6.肿瘤ABL1基因位点分型检测试剂盒的使用方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

（1）提取待测样品基因组DNA，以待测样品基因组DNA为模板进行PCR扩增：所用PCR引物为一对正向引物和反向引物，其PCR产物中含有检测相关位点，

正向引物为如SEQ ID NO.2所示：   5’-CACCATGGAGGTGGAAGAGT-3’，

反向引物为如SEQ ID NO.3所示：   5’-TCTGAGTGGCCATGTACAGC-3’；

（2）PCR的扩增产物进行LDR扩增；

（3）用测序仪的Genescan功能对LDR产物进行测试，分析得到的检测数据和扩增曲线图。

7.根据权利要求1所述的ABL1基因位点分型检测试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤（1）中待测样品基因组DNA提取为常规的血基因组抽提方法。

8.根据权利要求 1-5中任一项所述肿瘤ABL1基因位点分型检测试剂盒在检测ABL1基因中的应用。