[发明专利]含双因子的外周神经损伤修复胶原材料及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医用材料领域，涉及一种修复外周神经损伤的胶原材料，特别涉及一种含双因子的外周神经损伤修复胶原材料及其制备方法。

背景技术

外周神经损伤是临床常见的疾病之一，目前临床上应用的直接断端缝合技术或自体神经移植方法，由于具有其应用的局限性，不能充分解决临床困难。随着组织工程的发展，采用组织工程方法促进神经再生以修复周围神经损伤成为研究热点。

胶原支架材料能够为轴突的生长搭桥，起到引导轴突生长的作用。胶原蛋白是一种在组织工程中广泛应用的生物材料，它免疫原性低，生物相容性好，可降解性能好。本发明的发明人所在实验室前期工作中制备的有序胶原材料(LOCS)是一种很好的神经生长引导材料，能引导神经细胞轴突沿有序胶原材料细丝的方向生长，这样，就能引导神经元形成正确的突触连接，有助于神经功能的恢复[Ma F,Xiao Z,Chen B,Hou X,Dai J,Xu R.Linear ordered collagen scaffolds loaded with collagen-binding basic fibroblast growth factor facilitate recovery of sciatic nerve injury in rats.Tissue engineering Part A.2014；20:1253-62.Cao J,Xiao Z,Jin W,Chen B,Meng D,Ding W,et al.Induction of rat facial nerve regeneration by functional collagen scaffolds.Biomaterials.2013；34:1302-10.]

同时，有序胶原材料能结合神经营养因子，可以作为神经营养因子的载体。目前，尚未有关于结合双因子的外周神经损伤修复胶原支架材料在外周神经损伤修复中发挥作用的研究尚未见报道。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种修复外周神经损伤的胶原材料及其制备方法。

本发明所提供的修复外周神经损伤的胶原材料的制备方法，具体可包括如下步骤：将带有胶原结合区的睫状神经营养因子和带有胶原结合区的碱性成纤维细胞生长因子与有序胶原材料共同孵育，得到所述修复外周神经损伤的胶原材料。

在所述方法中，所述带有胶原结合区的睫状神经营养因子(CBD-CNTF)、所述带有胶原结合区的碱性成纤维细胞生长因子(CBD-bFGF)和所述有序胶原材料的配比可为300-500μg：300-500μg：70-130mg。在本发明的一个实施例中，所述带有胶原结合区的睫状神经营养因子(CBD-CNTF)、所述带有胶原结合区的碱性成纤维细胞生长因子(CBD-bFGF)和所述有序胶原材料的配比具体为400μg：400μg：100mg。

在所述方法中，所述孵育可为25-37℃(如25℃)孵育0.5-1小时(如1小时)。

在所述方法中，所述孵育时的液体环境具体为1×PBS。

所述1×PBS的pH为7.4，溶剂为水，溶质及其浓度如下：磷酸二氢钾0.27g/L，磷酸氢二钠1.42g/L，氯化钠8g/L，氯化钾0.2g/L。

在本发明中，所述孵育具体为：将100mg的所述有序胶原材料(如直径为50μm的有序胶原纤维)浸泡在0.5mL含400μg所述带有胶原结合区的睫状神经营养因子(CBD-CNTF)和400μg所述带有胶原结合区的碱性成纤维细胞生长因子(CBD-bFGF)的所述1×PBS中，25℃孵育1小时。

在本发明中，所述带有胶原结合区的睫状神经营养因子(CBD-CNTF)的氨基酸序列为如下(a)或(b)；所述带有胶原结合区的碱性成纤维细胞生长因子(CBD-bFGF)的氨基酸序列为如下(c)或(d)：

(a)序列表中序列1的第22-243位；

(b)序列表中序列1；

(c)序列表中序列2的第22-197位；

(d)序列表中序列2。

其中，(b)相对(a)在氨基端连接有6个His标签；(d)相对(c)在氨基端连接有6个His标签。

在本发明中，所述有序胶原材料(LOCS)的制备方法，具体可包括如下步骤：

1)将牛筋膜用体积百分浓度为1-1.5％(如1％)的磷酸三丁酯溶液处理24-72小时(如48小时)；