[发明专利]一种从石斛中提取毛兰素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高效、低成本的从石斛中提取毛兰素的方法，属于植物活性物质提取领域。

背景技术

石斛属Dendrobium Sw.为兰科最大属之一，共有l500多种植物，广泛分布于亚洲、欧洲及大洋洲等热带及亚热带地区。我国约有80多种，主要分布于西南、华东及华南地区。石斛属植物为附生植物，生长环境独特，对小气候环境要求十分严格。多生于温凉高湿的阴坡、半阴坡微酸性岩层峭壁上，群聚分布，上有林木遮阴，下有溪沟水源，冬春季节稍耐干旱，但严重缺水时常叶片落尽，裸茎渡过不良环境，到温暖季节重新萌发枝叶。在我国传统医学中，石斛属多种植物的新鲜或干燥茎被收做药用，统称石斛herba dendrobii。2000年以前《神农本草经》中就有记载。千年以来它一直和灵芝、人参、冬虫夏草等一样被列为上品中药。其性味：甘淡微咸。性属清润，清中有补，补中有清。古人把石斛当作药材。据《本草备至》叙述，它对人体有驱解虚热，益精强阴等疗效。

国产石斛分布于秦岭、淮河以南，我国的云南、广西、广东、贵州、台湾为国产本属植物的分布中心。 石斛属植物中主要有效成分为石斛类多糖及生物碱，另外还有酚类、菲类、倍半萜类及香豆素等。石斛多糖是从石斛中提取出来的具有多种生物活性且结构复杂的杂多糖或其复合物。大量研究证明，石斛联苄类成分具有抗肿瘤、增强免疫力、抗鼻咽癌、抗白内障等多种作用。我国目前对石斛菲类的开发利用并不多，从2006年至今，涉及石斛联苄类毛兰素的文献技术不多，关于石斛毛兰素的功效研究、产品开发等还存在着很大的研究价值和空间。

铁皮石斛是我国传统的名贵中药材。有人比较了石斛属的多种植物，发现联苄类化合物是铁皮石斛的抗癌特征性成分。随着人们对联苄类功效的认识增多，已有人发现联苄类化合物中的毛兰素具有较强的抗肿瘤生物活性。现代分析化学研究发现，石斛中含有石斛菲类、联苄类等多种生物活性成分，毛兰素是其中联节类化合物的一种，其结构式为3-轻基-4，3，4，5，-四甲氧基联节，分子量为318，在石解属植物中有广泛分布，其中鼓槌石斛中含量较高、其次流苏石斛。文献报道药效学研究证实，毛兰素对肺癌、肝癌、乳腺癌、多种人体肿瘤的生长均有抑制作用，是一种天然低毒的抗肝癌肿瘤药物。现有专利报道毛兰素提取方法有超临界二氧化碳萃取法，有机溶剂提取氯仿萃取、硅胶柱层析法、液相制备法等。这些提取方法设备投资成本高，萃取目标物杂质过多、氯仿萃取法毛兰素萃取物含量仅能达到1-10%、提取硅胶柱层析溶剂用量大周期长、填料重复利用性低，不适宜工业化大规模生产。

发明内容

本发明的目的是针对现有产业化分离毛兰素技术的不足，提供一种工艺设备简单、生产周期短、投资规模小、对环境污染相对较轻、制备成本低、得率较高的高纯度毛兰素的提取方法。

本发明通过以下方法实现本发明目的：

（1）取干燥石斛全株粉碎至粒度为40-60目；

（2）石斛粉末用pH=8-10的甲醇溶液回流提取3次，提取温度为75-80℃，其中第一次回流提取2-3h，第二次提取1.5-2h，第三次提取0.5-1h，合并三次提取液，回收甲醇得到粗提物；

（3）用乙腈超声溶解粗提物，过滤，不溶残渣再使用乙腈溶解一次过滤，合并乙腈溶解液，备用；

（4）按体积比1:1-1:2的比例，在乙腈溶解液中加入石油醚二氯甲烷混合溶液或者环己烷二氯甲烷混合溶液萃取，静置分层后取上层液，下层液再萃取分层，重复2-3次，合并上层液，下层液经薄层鉴别（展开剂为石油醚(60～90℃)与乙酸乙酯按体积比6:4混合制得）无毛兰素斑点后丢弃，上层液浓缩得到油性膏状物；

（5） 采用新配置的pH=10的甲醇溶液回流提取油性膏状物3次，温度60-80℃，合并三次提取液，用盐酸调节提取液pH=6后，静置24后过滤，即得到含有毛蓝素的沉淀，含有毛蓝素的沉淀用甲醇、乙醇或丙醇溶解成上样液，备用；

（6）取小孔径分离树脂加压装柱，用体积百分比浓度为35-50%的甲醇、乙醇或丙酮水溶液平衡柱子，然后将上样液缓慢滴加上样，上样完毕静置1-1.5h后用体积百分比浓度为40-60%甲醇、乙醇或丙酮水溶液加压洗脱，薄层鉴别（展开剂为石油醚(60～90℃)与乙酸乙酯按体积比6:4混合制得）收集毛兰素段洗脱液，浓缩回收溶剂，最后用石油醚冰乙酸混合溶液、石油醚丙酮混合溶或丙酮结晶2次，固体干燥即得到毛兰素，HPLC检测含量大于98.0%。