[发明专利]循环肿瘤细胞鉴定试剂盒和方法

权利要求书

1.一种循环肿瘤细胞鉴定试剂盒，其特征在于，包括有检测上皮细胞标志基因mRNA、和/或间质细胞标志基因mRNA的检测探针；所述上皮细胞标志基因选自：EPCAM、KRT16、KRT8、KRT18、KRT19中的一个或一个以上；所述间质细胞标志基因选自：CDH2、VIMENTIN、FN1、AKT2中的一个或一个以上。

2.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞鉴定试剂盒，其特征在于，还包括有白细胞标志基因mRNA的检测探针，所述白细胞标志基因为CD45。

3.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞鉴定试剂盒，其特征在于，所述检测探针包括：

(1)针对每个标志基因的捕获探针：所述捕获探针连接标志基因mRNA与扩增探针，每条捕获探针的碱基序列从5’端到3’端依次为：与待检测的标志基因mRNA结合的特异性序列P1、间隔臂序列、能与对应标志基因的扩增探针的P3互补配对的P2序列；所述P2为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配、与P1、P4和总mRNA之间均不存在特异性结合的序列；

(2)针对每个标志基因的扩增探针：每条扩增探针的碱基序列从5’端到3’端依次为：能与捕获探针P2互补配对的P3序列、间隔臂序列、P4序列，每条扩增探针的3’端还修饰有荧光基团；所述P4为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配、与P1、P2、P3和总mRNA之间均不存在特异性结合的序列；不同细胞种类标志基因的荧光基团互不相同。

4.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞鉴定试剂盒，其特征在于，所述检测探针包括：

(1)针对每个标志基因的捕获探针：所述捕获探针连接标志基因mRNA与扩增探针，每条捕获探针的碱基序列从5’端到3’端依次为：与待检测的标志基因mRNA结合的特异性序列P1、间隔臂序列、能与对应标志基因的扩增探针的特异性序列P3互补配对的P2序列；所述P2为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配、与P1、P4和总mRNA之间均不存在特异性结合的序列；

(2)针对每个标志基因的扩增探针：每条扩增探针的碱基序列从5’端到3’端依次为：能与捕获探针P2互补配对的P3序列、间隔臂序列、P4序列，所述P4序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配、与P1、P2、P3和总mRNA之间均不存在特异性结合的序列；

(3)针对每种细胞种类的标记探针：所述标记探针具有与扩增探针P4互补配对的序列P5，且末端修饰有荧光基团；不同细胞种类标志基因的荧光基团互不相同。

5.根据权利要求3或4所述的循环肿瘤细胞鉴定试剂盒，其特征在于：针对EPCAM基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.10中的2条或2条以上，针对KRT16基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.11～SEQ ID NO.20中的2条或2条以上，针对KRT8基因特异性序列P1的选自SEQ ID NO.21～SEQ ID NO.30中的2条或2条以上，针对KRT18基因特异性序列P1的选自SEQ ID NO.31～SEQ ID NO.40中的2条或2条以上，针对KRT19基因特异性序列P1的选自SEQ ID NO.41～SEQ ID NO.50中的2条或2条以上；针对上皮细胞标志基因的捕获探针的特异性序列P2为SEQ ID NO.101、P3序列为SEQ ID NO.104、P4序列为SEQ ID NO.107。

6.根据权利要求3或4所述的循环肿瘤细胞鉴定试剂盒，其特征在于：针对CDH2基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.51～SEQ ID NO.60中的2条或2条以上，针对VIMENTIN基因特异性序列P1选自SEQ ID NO.61～SEQ ID NO.70中的2条或2条以上，针对FN1基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.71～SEQ ID NO.80中的2条或2条以上，针对AKT2基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.81～SEQ ID NO.90中的2条或2条以上；针对间质细胞标志基因的捕获探针的特异性序列P2为SEQ ID NO.102、P3序列为SEQ ID NO.105、P4序列为SEQ ID NO.108。