[发明专利]一株内生真菌及其生物转化甘草酸为甘草次苷的方法

权利要求书

1.一种内生真菌生物转化甘草酸为GAMG的方法，包括如下步骤：

1）内生真菌的活化及种子液的制备，所述的内生真菌命名为DX-SES3，分类为小球壳孢 属菌Microsphaeropsisarundinis，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2014 年5月3日，保藏号为CCTCCM2014177；

2）GAMG生物转化：将步骤1）的种子液按质量分数20-40%的接种量加入到转化培养基 中，进行GAMG的生物转化；

3）GAMG的分离制备：生物转化后的GAMG富聚于内生真菌菌球的表面，布氏漏斗抽滤或 六层纱布过滤，收集菌体，用体积比为20%～100%的乙醇溶液冲洗菌体3-5次，收集乙醇溶 液，后减压浓缩，再喷雾干燥，获得纯度较大的GAMG成品，并用HPLC、LC-MS进行检测。

2.如权利要求1所述的内生真菌生物转化甘草酸为GAMG的方法，其特征在于所述的种 子液培养制备为：将内生真菌DX-SES3（Microsphaeropsisarundinis）接种到PDA斜面培养 基中20～30℃培养活化72～108小时，并制作孢子悬浮液，将孢子悬浮液加入到种子培养基 中，20～30℃，150～300r/min，摇床培养至对数生长期。

3.如权利要求1所述的内生真菌生物转化甘草酸为GAMG的方法，其特征在于所述的种 子培养基的组成为：每升培养基中含葡萄糖10～40g，甘草酸或甘草酸铵盐0.1～1g， KH₂PO₄1.0～3.0g，NH₄NO₃2.0～5.0g，NaCl0.3～0.8g，酵母粉0.05～0.3g，MgSO₄0.1～ 0.5g，CaCl₂0.01～0.5g，FeSO₄0.014g，ZnSO₄·7H₂O2.9mg，MnCl₂·4H₂O2.0mg， CuSO₄·5H₂O0.25mg，CoCl₂·6H₂O0.24mg，Na₂MoO₄·2H₂O0.24mg，H₃BO₃0.03mg，其 余为纯水，调pH为5.0～7.0。

4.如权利要求1所述的内生真菌生物转化甘草酸为GAMG的方法，其特征在于所述的转 化培养条件为：28℃～40℃，转速150～280r/min。

5.如权利要求1所述的内生真菌生物转化甘草酸为GAMG的方法，其特征在于所述的转 化培养基组成为：每升培养基中含甘草酸或甘草酸铵盐2～30g，KH₂PO₄1.0～3.0g， NH₄NO₃2.0～4.0g，NaCl0.3～0.8g，酵母粉0.05～0.1g，MgSO₄0.1～0.5g，CaCl₂0.01～0.5g，FeSO₄0.014g，ZnSO₄·7H₂O2.9mg，MnCl₂·4H₂O2.0mgCuSO₄·5H₂O 0.25mg，CoCl₂·6H₂O0.24mg，Na₂Mo₄·2H₂O0.24mg，H₃BO₃0.03mg，其余为纯水，调 pH为3.5～9.0，其中甘草酸或甘草酸铵盐是菌体产β-葡萄糖醛酸苷酶的诱导剂。