[发明专利]长链非编码RNA CRNDE的应用方法

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及LncRNA CRNDE在制备胶质瘤患者预后试剂中的应用方法。

背景技术

胶质瘤约占神经系统肿瘤的40.49％，是最常见的肿瘤之一，目前采用的治疗手段包括手术治疗联合化疗和放疗，尤为手术切出效果明显。但是胶质瘤病人的生存期仍无明显延长。据相关报道，胶质瘤病人的5年生存率低于25％。目前，对胶质瘤的预后判定没有金标准，也没有特异性指标，远远不能适应对胶质瘤进行预后判定的需求。因此，对人胶质瘤进行预后判定，以便选择最佳治疗方案，显著提高患者生存率，成为神经外科领域亟待解决的重要课题。

lncRNA是一类转录本长度大于200bp的非编码RNA，具有相对较长的核苷酸链，其分子内部具有特定的二级空间结构，能提供与蛋白质结合的多个位点，或与DNA、RNA之间通过碱基互补配对原则发生特异性、动态性相互作用。近年来，lncRNA作为一类重要的调控分子及其在临床诊断、化疗敏感性和预后评价等方面的应用价值，已经逐渐得到研究者的重视。有研究表明HOTAIR在原发乳腺肿瘤和转移瘤中的表达都会增加，原发肿瘤中HOTAIR的表达水平可以用来有效预测癌转移和死亡。lncRNA PCA3在前列腺癌中高度过表达，这种lncRNA是在尿液中发现的，相当便于临床检测。由此可见，lncRNA作为诊断、预后和治疗的分子标志物具有巨大潜力。

发明内容

本发明的目的是提供一种LncRNA CRNDE的应用方法，即LncRNA CRNDE(colorectal neoplasia differentially expressed)定位于染色体16q12.2，GeneBank登录号：NR_110452能作为胶质瘤预后的判断标准，用于制备胶质瘤患者的预后制剂，更进一步能够提供一种性价比高，易于推广应用的胶质瘤预后预测试剂盒。

长链非编码RNA CRNDE的应用方法，所述的长链非编码RNA CRNDE用于制备胶质瘤患者的预后制剂，该长链非编码RNA CRNDE的序列见SEQ NO:1。

所述的用于制备胶质瘤患者的预后制剂包括实时荧光定量PCR检测试剂。

所述的实时荧光定量PCR检测试剂包括进行实时荧光定量PCR的特异性引物：

LncRNA CRNDE正向引物：5'-CTGCGTGACAACTGAGGA-3'，

LncRNA CRNDE反向引物5'-GTAGGATGCCACTGGAAAT-3。

所述的实时荧光定量PCR检测试剂为试剂盒，

该试剂盒包括：(1)从胶质瘤组织中抽提总RNA所用试剂，包括RNA稳定溶液、Trizol试剂、三氯甲烷、异丙醇、无酶水；(2)以总RNA为模板将LncRNA CRNDE逆转录为cDNA所用试剂，包括逆转录缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸、RNA酶抑制剂、MMLV逆转录酶以及LncRNA CRNDE所用随机引物；(3)将cDNA实时定量PCR所用试剂，包括LncRNACRNDE实时荧光定量PCR特异性引物、U6snRNA内参特异性PCR引物、实时荧光定量SYBR染料、无酶水；

LncRNA CRNDE实时荧光定量PCR特异性引物

LncRNA CRNDE正向引物5'-CTGCGTGACAACTGAGGA-3'，

LncRNA CRNDE反向引物5'-GTAGGATGCCACTGGAAAT-3。

U6snRNA内参特异性PCR引物：

正向引物为5′-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3′，

反向引物为5′-GGAACGCTTCACGAATT TG-3′。