[发明专利]一种利用比色法测定葡萄糖浓度的方法

权利要求书

1.一种利用比色法测定葡萄糖浓度的方法，其包括以下步骤：

采用葡萄糖氧化酶催化样品中的葡萄糖，使之释放出过氧化氢；同时向样品中添加辣根过氧化物酶与金纳米棒，辣根过氧化物酶催化过氧化氢对金纳米棒的蚀刻，待金纳米棒的颜色稳定后，采用比色法确定样品中葡萄糖浓度。

2.根据权利要求1所述的测定葡萄糖浓度的方法，其特征在于：还包括在辣根过氧化物酶催化过氧化氢对金纳米棒蚀刻前，添加卤化物。

3.根据权利要求2所述的测定葡萄糖浓度的方法，其特征在于：所述卤化物可选自十六烷基三甲基溴化铵或碘化钠或溴化钠或溴化铵的任一种。

4.一种葡萄糖检测反应体系，其组分包含：葡萄糖氧化酶、辣根过氧化物酶、金纳米棒、卤化物与硅胶。

5.根据权利要求4所述的葡萄糖检测反应体系，其特征在于：所述葡萄糖检测反应体系中葡萄糖氧化酶的浓度为30—60nM，辣根过氧化物酶浓度为0.5—2μM，卤化物浓度为1-10mM，金纳米棒的浓度按金单质计为0.10—0.20mM，以及余量的硅胶。

6.根据权利要求5所述的葡萄糖检测反应体系，其特征在于：所述葡萄糖检测反应体系中还包含有20mM的柠檬酸盐缓冲液；所述葡萄糖检测反应体系的pH为3.8—4.1。

7.根据权利要求6所述的葡萄糖检测反应体系的制备方法，包括以下工序：a.制备金纳米棒；b.制备硅酸盐前体；c.向硅酸盐前体中添加葡萄糖氧化酶、金纳米棒、辣根过氧化物酶、卤化物及柠檬酸盐缓冲液；d.固化葡萄糖检测反应体系。

8.根据权利要求7所述的葡萄糖检测反应体系的制备方法，其特征在于：所述金纳米棒的制备是指将浓度为0.05 M的氯金酸溶液0.025-0.030毫升和浓度为0.1 M十六烷基三甲基溴化铵3-5毫升加入新鲜配制的浓度为0.01M硼氢化钠溶液0.3毫升形成的晶核后，加入生长溶液所制成的；所述生长溶液其原料包括浓度0.1M抗坏血酸0.05-0.10毫升、浓度0.05M的氯金酸0.1-0.3毫升、浓度0.01M硝酸银0.10-0.15毫升、浓度1M的盐酸溶液0.15-0.20 毫升和0.1M 的十六烷基三甲基溴化铵10-20mL。

9.根据权利要求8所述的葡萄糖检测反应体系的制备方法，其特征在于：还需除去金纳米棒中的卤素，具体为将制得的金纳米棒以7000rpm下离心处理20分钟，弃去上清液。

10.根据权利要求9所述的葡萄糖检测反应体系的制备方法，其特征在于：制备硅酸盐前体是指按重量份计，将1-5份的硅酸钠与10—20份的去离子水混合成硅酸钠溶液，然后向其加入按重量份计3—8份的阳离子交换树脂，以除去过酸钠溶液中的钠离子和氢离子，直至所述硅酸钠溶液的pH为3.8—4.1，即获得所述硅酸盐前体；所述固化葡萄糖检测反应体系是指将葡萄糖反应体系置于微孔板中，在4℃下静置48小时。