[发明专利]一种人类8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶活性的比色分析方法有效
| 申请号： | 201410203778.2 | 申请日： | 2014-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN104165884A | 公开（公告）日： | 2014-11-26 |
| 发明（设计）人： | 赵慧敏;袁芳;刘猛;全燮;张耀斌 | 申请（专利权）人： | 大连理工大学 |
| 主分类号： | G01N21/78 | 分类号： | G01N21/78;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 大连理工大学专利中心 21200 | 代理人： | 李宝元;梅洪玉 |
| 地址： | 116024 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 人类 氧代鸟 嘌呤 dna 糖基化酶 活性 比色 分析 方法 | ||
1.一种人类8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶活性的比色分析方法，其特征在于，步骤如下：
(1)向0.1～5.0μM的DNA序列S1溶液中加入浓度为0.1～5.0μM的DNA序列S2溶液，在85～100℃温度下反应0.5～2min，继续在10～30℃温度下反应1～5min，如此温度交替反应8～15次，使DNA序列S1与DNA序列S2杂交反应成双链DNA；其中，所述的DNA序列S1为含有8-氧代鸟嘌呤的DNA序列，DNA序列S2为DNA序列S1的互补DNA序列；
(2)依次向步骤(1)获得的双链DNA溶液中加入活性值不大于0.5U/μL的hOGG1、0.01～1.0mg/mL牛血清蛋白和0.01～1.0M氰基硼氢化钠，在35～40℃温度下反应0.5～5h，使hOGG1捕获到DNA序列S1上；然后在80～100℃温度下反应1～10min，终止反应；
(3)向步骤(2)获得的混合液中加入0.05～1.5U/μL核酸外切酶I和0.2～8.0U/μL核酸外切酶III，35～40℃温度下静置10～60min；再加入0.5～40.0μg/mL石墨烯/纳米金，混合均匀；
(4)向步骤(3)得到的产物中依次加入0.05～10.0mM显色剂和1.0～100.0mM过氧化氢，将得到的混合液立即进行吸光度测定。
2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述的显色剂为四甲基联苯胺或2，2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐。
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