[发明专利]利用4个蛋白联合预测食道癌患者预后的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及联合多个蛋白抗体并利用免疫组织化学超敏型二步法去检测食道癌患者标本的表达情况进而预测患者预后的试剂盒。

背景技术

食道鳞状细胞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma，ESCC)在我国是一种常见的上消化道恶性肿瘤，在国人的恶性肿瘤死亡率中位居第四位。全世界每年40余万的新发食道癌病例中，一半以上发生在我国，我国也是世界上公认的食道癌第一高发国。上世纪70年代，在全国范围内实施了恶性肿瘤普查，确立河北磁县、河南林县、山西阳泉、四川盐亭、广东潮汕和江苏淮安等地区为中国食道癌六大高发区。

准确预测食道癌患者的预后对于临床进一步的治疗和随访具有重要意义。然而，目前除了国际TNM分期外还没有一种简便有效的方法可以更加准确地预测食道癌患者的预后。然而，TNM分期预测患者的预后比较繁琐，需要准确地评价肿瘤的浸润深度、转移淋巴结的个数、肿瘤有无远处转移等，况且国际TNM分期的制定缺少大量国人食道癌的病例资料，因此在评价我国患者的预后时适用性比较差，而本发明所采用的4个指标联合预测患者预后的试剂盒比单个指标检测具有更高的预测效果，同时也明显高于TNM分期的预测能力，并且本发明所基于的免疫组织化学超敏型二步法是一种成熟可靠、可在基层医院广泛使用的方法。本试剂盒中4种抗体蛋白的背景介绍如下。

δ-catenin蛋白作为黏附分子Catenin家族中的一员，除了在神经元突触处发挥重要的生理作用外，其在肿瘤演进过程中所发挥的作用也越来越受到人们的关注。最近的文献也报道了δ-catenin在肺癌、前列腺癌、大脑星形细胞瘤及卵巢癌中的表达明显增高且和患者的不良预后密切相关。然而，在国人恶性肿瘤死亡率居第四位的食道癌中δ-catenin的表达情况如何及其与患者预后的关系尚不清楚。本发明的前期研究发现δ-catenin在食道癌组织中高表达并与患者的不良预后密切相关。

Dynamin-2蛋白主要定位在细胞连接处，并参与细胞伪足的形成。在子宫颈鳞状细胞癌中Dynamin-2的表达增加。本发明的前期研究发现Dynamin-2在食道癌组织中的表达与患者的不良预后密切相关。

Erbin蛋白定位在细胞连接半桥粒处，在皮肤鳞状细胞癌中Erbin的表达增加。本发明的前期研究发现Erbin在食道癌组织中高表达并与患者的不良预后密切相关。

LAP-1蛋白也定位在细胞连接处，特别是神经元突触膜上。该蛋白在肿瘤组织中表达的研究甚少。本发明的前期研究发现LAP-1在食道癌组织中的表达与患者的不良预后密切相关。

虽然上述每种蛋白均具有预测食道癌患者预后的能力，但把4种蛋白联合起来预测食道癌患者的预后则具有更强的判断效能，甚至高于国际公认的TNM分期的预测能力。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种基于免疫组织化学方法的4个蛋白抗体联合预测食道癌患者预后的试剂盒。

其中，上述的免疫组织化学方法主要是检测中性福尔马林固定和石蜡包埋的标本。

其中，上述试剂盒主要包括4种蛋白抗体，分别是δ-catenin、Dynamin-2、Erbin和LAP-1抗体。

其中，上述试剂盒还包括：山羊血清，0.01M柠檬酸盐修复液，3％H₂O₂，Polymer增强剂，Polymer聚合物，DAB显色试剂，PBS溶液。

附图说明

图1是δ-catenin蛋白在不同表达人群的Kaplan-Meier生存曲线(X²＝6.671，P＝0.010)。

图2是Dynamin-2蛋白在不同表达人群的Kaplan-Meier生存曲线(X²＝5.181，P＝0.023)。

图3是Erbin蛋白在不同表达人群的Kaplan-Meier生存曲线(X²＝4.633，P＝0.031.)。

图4是LAP-1蛋白在不同表达人群的Kaplan-Meier生存曲线(X²＝8.546，P＝0.003)。

图5是4种蛋白联合后判断该人群的Kaplan-Meier生存曲线(X²＝18.574，P<0.001.)。