[发明专利]一种免疫层析试纸条的定量检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及干化学检测领域，特别是涉及一种免疫层析试纸条的定量检测方法。

背景技术

免疫层析技术是使用硝酸纤维素膜等作为反应物支撑的载体，利用膜的孔隙效应进行反应。该技术可分为纵向扩散和横向扩散两种。早期诞生的是纵向扩散的斑点金杂交法，但终因其操作复杂未能成为主流试剂推广使用。随着膜技术的发展，侧向流横向扩散试纸条显示出良好的优势，并得到极大的推广。侧向流免疫层析技术中应用最广泛的胶体金快速诊断试纸用于早早孕（HCG）的检测中，由于其方便、快捷、特异性高，特别适合即时诊断，因此其应用十分广泛，成为侧向流免疫层析技术中的代表性产品。

目前，市场上的胶体金、量子点、乳胶、荧光等多种免疫层析试纸条，大多只能完成定性检测或者半定量检测，定量检测非常困难。主要原因是在侧向流免疫层析过程中，所测量的目标信号是一个逐渐增加的过程，是一个动态变化。传统的终点法仅能用于定性或半定量，无法实现精确定量；其次，当面对待检物质的含量变化范围极大时（比如三个数量级以上），市售试纸条往往无能为力，尤其是当样本浓度较高时，甚至常常出现假阴性的结果。即使能够检测到较高的浓度，在高浓度区域准确度也极差。

因此，如何增加试纸条检测的灵敏度，同时增加试纸条的线性检测范围一直是困扰试纸条发展的瓶颈。试纸条生产厂家往往追求较高的灵敏度，但忽视了高灵敏度区域试纸条线性检测范围变窄这一现状。当面对目标物浓度较高的待测样本时，必须经过稀释才能进行测量，否则将大量出现假阴性结果。而在临床应用时，操作人员也不得不进行手动稀释，增加了临床检验工作人员的劳动复杂度。因此，在不影响试纸条检测限的同时，如何增加其线性检测范围是试纸条性能的重要体现。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种免疫层析试纸条的定量检测方法，能够同时进行低浓度测量和高浓度测量，增加试纸条的线性检测范围，提高检测的准确度，实现对目标检测物的精确定量检测。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种免疫层析试纸条的定量检测方法，包括步骤为：

（1）配制标准品溶液并用包括有内参线、至少一条的检测线和过量抗原检测线的免疫层析试纸条检测，获取能够测量的所述免疫层析试纸条上抗原抗体反应强弱的检测信号，得到读取结果；

（2）根据步骤（1）中所述读取结果，所述至少一条检测线中有n-1条检测线的检测信号达到阈值，用第n条检测线的测量结果进行标准曲线的绘制，获得n条以标准品溶液浓度为横坐标，以所述免疫层析试纸条上抗原抗体反应强度为纵坐标的标准曲线，其中n为大于1的自然数；

（3）将待测液滴加于免疫层析试纸条上并检测，获取能测量的所述免疫层析试纸条上抗原抗体反应强弱的检测信号，得到读取结果；

（4）根据步骤（3）中所述读取结果，所述至少一条的检测线中有n-1条检测线的检测信号达到阈值，将第n条检测线的读取结果利用所述的第n条标准曲线进行线性回归，演算得到所述待测液的浓度。

在本发明一个较佳实施例中，步骤（2）中所述检测信号为吸收光信号、反射光信号、荧光信号、磁场强度信号、声场强度信号或电场强度信号。

在本发明一个较佳实施例中，所述读取结果为所述第n条检测线与所述内参线的检测信号强度面积比。

在本发明一个较佳实施例中，所述读取结果为所述第n条检测线与所述内参线的最大检测信号强度比。

在本发明一个较佳实施例中，当所述免疫层析试纸条上所述检测线的检测信号全部达到阈值，且所述过量抗原检测线的检测信号为0时，所述待测液的浓度超过所述免疫层析试纸条的线性检测范围。

本发明的有益效果是：本发明的免疫层析试纸条的定量检测方法，该方法能够解决低浓度测量以及高浓度测量同时进行的问题，增加试纸条的线性检测范围，提高检测的准确度，实现对目标检测物的精确定量检测，可以用于血清标志物、微生物抗原、病毒颗粒、违禁药品等生物大分子或小分子的定量检测。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图，其中：

图1是本发明的定量检测方法中待测液中使用双抗体夹心法当抗原浓度低于最低检测限时检测信号强度分布图；

图2是本发明的定量检测方法中待测液中使用双抗体夹心法当抗原浓度在检测范围内时检测信号强度分布图；