[发明专利]鉴别我国南疆3种常见蛉种的多重PCR试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种鉴别我国南疆3种常见蛉种的多重PCR试剂盒，其特征在于，包括：

(1)鉴别我国南疆3种常见蛉种的多重PCR通用的正向引物，其序列如SEQ ID NO.1所示；

(2)鉴别我国南疆3种常见蛉种的多重PCR通用的反向引物，其为SEQ ID NO.2所示的序列、SEQ ID NO.3所示的序列和SEQ ID NO.4所示的序列；

其中，我国南疆3种常见蛉种包括：长管白蛉、吴氏白蛉和亚历山大白蛉。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括：聚合酶链式反应试剂。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述聚合酶链式反应试剂，包括：

1)聚合酶链式反应缓沖液；

2)四种脱氧核糖核苷酸，四种脱氧核糖核苷酸的浓度均为2.5mmol/L；

3)牛血清白蛋白，其浓度为40mg/mL；

4)ExTaq酶，其为5U/μL；

5)灭菌双蒸水。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述聚合酶链式反应缓沖液的成份如下：

Tris-HCl100mmol/L

KCl 500mmol/L

MgCl₂ 15mmol/L。

5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中的正向引物、SEQ ID NO.2所示的序列、SEQ ID NO.3所示的序列和SEQ ID NO.4所示的序列的浓度均为10μmol/L。

6.一种利用如权利要求1～5任一项所述的试剂盒进行鉴别我国南疆3种常见蛉种的多重PCR方法，其特征在于，步骤包括：

(1)提取我国南疆3种常见蛉种的DNA，作为DNA模板；

其中，我国南疆3种常见蛉种包括：长管白蛉、吴氏白蛉和亚历山大白蛉；

(2)利用所述试剂盒，将DNA模板在PCR扩增仪上进行扩增；

(3)对扩增的产物进行电泳鉴别。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，扩增中的反应体系如下：

聚合酶链式反应缓沖液5μL、2.5mmol/L dNTPs4μL、10μmol/L的如SEQ ID NO.1所示的正向引物3.0μL、10μmol/L的如SEQ ID NO.2所示的序列1μL、10μmol/L的如SEQ ID NO.3所示的序列1μL、10μmol/L的如SEQ ID NO.4所示的序列1μL、40mg/mL牛血清白蛋白1μL、5U/μL ExTaq聚合酶0.36μL、DNA模板1.5μL，用灭菌双蒸水补足体积至50μL；

扩增中的反应条件如下：

95℃3min；95℃25s，54℃20s，72℃30s，共37个循环；72℃延伸7min。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，电泳的条件为：采用1.5g/100mL～2g/100mL的琼脂糖凝胶进行电泳。

9.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，鉴别的方法如下：

长管白蛉的PCR扩增片段的长度为248bp，吴氏白蛉的PCR扩增片段的长度为632bp，亚历山大白蛉的PCR扩增片段的长度为395bp。

10.一种利用如权利要求1～5任一项所述的试剂盒在鉴别长管白蛉、吴氏白蛉、亚历山大白蛉中的应用。