[发明专利]扁竹根抗糖尿病多肽的制备方法

权利要求书

1.扁竹根抗糖尿病多肽的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：

（1）称取100~500 g扁竹根粉末，用液氮研磨后加入1~4 L的缓冲液浸泡24 h，再用纱布过滤得到扁竹根的提取液，离心除去沉淀；在上清液中加入硫酸铵至质量百分比浓度为10%~80%，过夜，再离心，除去上清液，得到蛋白浸膏；用缓冲液溶解蛋白浸膏后装入截留分子量范围3000-10000的透析袋，透析三天，然后冻干得到蛋白质粉末；

（2）称取步骤（1）得到的蛋白粉末0.1~2g, 配成质量百分比浓度为0.3%~3%的扁竹根蛋白液，加入蛋白酶水解, 8~15 h后在95 ℃的水浴中灭酶10 min，冷却到室温后在8000 r/min下离心10 min, 取上清液得到酶解产物；

 (3) 将步骤（2）得到的酶解产物再进行凝胶色谱葡聚糖凝胶Sephadex G-25柱层析分离纯化，得到三个洗脱峰，收集具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的第二个蛋白峰冻干保存，得到扁竹根抗糖尿病多肽。

2.根据权利要求1所述的扁竹根抗糖尿病多肽的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述缓冲液为磷酸缓冲液, pH=6~9；离心温度为4~8℃，转速为3000~10000 r/min, 离心时间5~50 min。

3.根据权利要求1所述的扁竹根抗糖尿病多肽的制备方法，其特征在于，步骤（2）所述蛋白酶为碱性蛋白酶Alcalase 2.4L，水解温度35~65℃， pH=5~10水解时间4~15 h。

4.根据权利要求1所述的扁竹根抗糖尿病多肽的制备方法，其特征在于步骤（3）所述柱层析条件为：柱体积为150 mL，上样量为1~5mL，流动相为水，流速为0.1~0.8 mL/min，每6 min收集一管，检测波长为220nm。

5.根据权利要求1所述的扁竹根抗糖尿病多肽的制备方法，其特征在于，所述扁竹根抗糖尿病多肽具有α-葡萄糖苷酶抑制活性。