[发明专利]一种癌胚抗原含量检测方法及装置

说明书

技术领域

本发明属于生物医学分析检测领域，更具体地，涉及一种癌胚抗原含量检测方法及装置。

背景技术

癌胚抗原(CEA)是一种广谱性的肿瘤标记物，其对大肠癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、卵巢癌等多种肿瘤的诊断和筛查方面具有重要的参考意义，对术后的疗效判断、病情发展、检测和预后估计是一个较好的标记物。因此对其进行高灵敏度高特异性的检测对临床医学有着非常重要的意义。

目前，检测癌胚抗原含量的方法有免疫分析法，如色度免疫法、荧光免疫法、电化学免疫分析法、化学发光免疫分析法、电化学发光免疫分析法等，还有基于癌胚抗原适配体和荧光共振能量转移（FRET）原理的传感检测技术。其中基于癌胚抗原适配体和FRET的检测方法，由于适配体特异性识别靶分子的特点，可以特异性地分析检测癌胚抗原。

然而对因为常规的FRET测量方法，由于被靶分子从猝灭剂上特异性竞争下来的荧光供体，其荧光仍然可以被溶液中存在的猝灭剂不同程度的猝灭，低浓度的靶分子不能产生有效的荧光恢复，因此目前基于适配体和FRET的癌胚抗原检测的检测灵敏度较低，不足以满足癌症早期低浓度癌胚抗原的检测要求。

发明内容

针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种癌胚抗原检测方法及装置，其目的在于结合毛细管电泳分离的手段和适配体/氧化石墨烯传感技术，检测低含量的癌胚抗原，由此解决目前癌胚抗原检测的技术灵敏度低，不能检测早期癌症的问题。

为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种癌胚抗原的检测方法，包括以下步骤：

（1）制备癌胚抗原适配体-荧光物：将浓度为10^-7M-10^-5M荧光物质和连接剂溶液均匀混合，再将该混合液与癌胚抗原适配体的缓冲溶液混合均匀，使得荧光物质、连接剂、癌胚抗原适配体的摩尔比在1：200～1000：5～20，荧光物质的最终浓度在10^-8M至10^-5M，连接剂的最终浓度在0.025mg/ml至0.05mg/ml，癌胚抗原适配体的最终浓度在5×10^-8M至2×10^-4M；荧光物和适配体之间发生缩合反应，除去过量的癌胚抗原适配体，得到含癌胚抗原适配体-荧光物的缓冲液；

（2）制备癌胚抗原适配体-荧光物/氧化石墨烯溶液：将步骤（1）中制备的含癌胚抗原适配体-荧光物的缓冲液与氧化石墨烯溶液均匀混合，反应1至8小时，氧化石墨烯使得癌胚抗原适配体-荧光物荧光淬灭，得到癌胚抗原适配体-荧光物/氧化石墨烯溶液；

（3）制备毛细管电泳样品：将待测样品与步骤（2）中制备的癌胚抗原适配体-荧光物/氧化石墨烯溶液混合均匀，反应2至8小时从而恢复荧光，得到毛细管电泳样品；

（4）检测恢复荧光强度：将毛细管电泳样品进行毛细管电泳，距阳极缓冲液池的距离为毛细管总长的1/2-2/3处进行荧光检测，获得恢复荧光强度，根据恢复荧光强度，按照荧光强度标准曲线，测定癌胚抗原浓度。

优选地，所述癌胚抗原的检测方法，其步骤（1）中荧光物质、连接剂与癌胚抗原适配体的摩尔比为1：200：5。

优选地，所述癌胚抗原的检测方法，其步骤（1）所述荧光物质为有机荧光染料或无机荧光纳米颗粒，常用为硒化镉、碲化镉、硫化镉、硫化锌、硒化锌、碲化锌、硫化汞、硒化汞、碲化汞、砷化镓、砷化铟、碳化硅、硒化铅、硒化镁、硫化锌包被硒化镉核壳型（CdSe/ZnS）、硫化锌包碲化镉核壳型（CdTe/ZnS）、碳点、纳米金簇、纳米银簇、荧光石墨烯或复合荧光二氧化硅纳米粒子，优选为半导体量子点。

优选地，所述癌胚抗原的检测方法，其步骤（1）所述连接剂为1-乙基-3-（3-二甲胺基丙基）碳二亚胺盐酸盐与N-羟基硫代琥珀酰亚胺的混合物，其中按照摩尔比，N-羟基硫代琥珀酰亚胺不超过50%。

优选地，所述癌胚抗原的检测方法，其所述步骤（2）其氧化石墨烯溶液浓度为40-60μg/mL。

优选地，所述癌胚抗原的检测方法，其步骤（4）毛细管电泳使用的毛细管为内径在50-100μm之间的弹性聚酰亚胺涂层熔融石英管。

优选地，所述癌胚抗原的检测方法，其步骤（4）毛细管电泳其电场强度在150-400V/cm间，电泳温度恒定在20-30℃间，阳极、阴极及电泳缓冲液为pH8.4-9.2的Na₂B₄O₇-H₃BO₃溶液，虹吸进样高度15cm、时间15-35s。