[发明专利]新女贞子苷在抗阿霉素心肌毒性中的应用及以新女贞子苷为主要活性成分的药物组合物

说明书

技术领域

本发明属于药物筛选与评价方法领域，具体涉及新女贞子苷在抗阿霉素心肌毒性中的应用及以新女贞子苷为主要活性成分的药物组合物。

背景技术

新女贞子苷是橄榄中的有效成分，在地中海饮食中占有重要地位。在早期的研究中，人们认为是橄榄油的中橄榄苦苷发挥重要作用，经过不断深入研究发现，橄榄苦苷的水解产物新女贞子苷具有更强的生理活性。其结构简单，分子量小，具有良好的水溶性和脂溶性，能防止辐射、氧自由基及其他因素对视网膜造成损伤，具有良好的治疗和保健功能，受到国内外研究者的广泛关注。

有研究表明，新女贞子苷可诱导细胞内具有解毒作用的二酶相体系，能防止香烟中有毒成分丙烯醛对视网膜造成的损伤，调节线粒体功能，对视觉具有保护作用，对黄斑性变性等眼部疾病具有改善作用（Zhu Lu，Liu Zhong bo，Feng Zhihui，et al.Hydroxytyrosol protects against oxidative damage by simultaneous activation of mitochondrial biogenesis and phase II detoxifying enzyme systems in retinal pigment epithelial cells[J].J Nutr Biochem，2010，21(11)：1089-1098.）。

公开号为CN101674817B的中国专利文献公开了新女贞子苷在诱导或增强软骨修复或软骨再生中的用途，该申请人发现，新女贞子苷能有效诱导或增强软骨细胞的增殖，刺激软骨细胞增殖和提高它们生产细胞外基质组分的能力，进而促进软骨修复和再生。

申请号为201210203464.3的中国专利文献公开了新女贞子苷用于改进线粒体功能的用途，该申请人发现，新女贞子苷通过线粒体呼吸链复合物的活化和线粒体生物发生的提高改进线粒体功能。

虽然现有技术中已报道新女贞子苷具有多种生物活性，但至今为止还未报道过新女贞子苷能够减轻阿霉素诱发的心肌毒性。

阿霉素（Doxorubicin，DOX）是临床上常用的广谱抗肿瘤药物之一，被广泛地应用于实体瘤、白血病、淋巴瘤、乳腺癌等肿瘤治疗。但阿霉素会产生累积性、剂量依赖性的心肌毒性，并进一步发展成不可逆性心肌损伤，最终导致充血性心力衰竭，因此严重地抑制了其临床应用。因此寻找获得抗阿霉素心肌毒性的活性物质对阿霉素的临床应用具有重要意义。

发明内容

本发明提供了新女贞子苷在抗阿霉素心肌毒性中的应用，申请人研究发现，新女贞子苷对因使用阿霉素而诱发的心肌毒性具有显著抗性，对心肌细胞具有较强的保护作用。

本发明的新女贞子苷新用途是通过如下方法发现的：

（1）将贞芪扶正颗粒用纯水溶解，离心取上清液；

（2）用大孔树脂将所述上清液依次用水、40%乙醇、95%乙醇洗脱，分别收集各洗脱组分，减压浓缩至干；

（3）将浓缩后的洗脱组分通过制备液相色谱进行分离，收集各馏分，干燥后作为待筛选物质，备用；

（4）取心肌细胞，加入待筛选物质进行预保护；

所述心肌细胞优选为对数生长期细胞，可选用常见的H9c2心肌细胞；细胞密度优选为1～100个/μL（对于96孔板为100～10000个/孔），更优选为20～40个/μL，最优选为40个/μL，适宜的细胞密度有利于染色后检测荧光强度并进行比较。

待筛选物质的终浓度可先进行预实验确定，以不会对心肌细胞产生毒性为宜，预保护时间优选为30～180min，更优选为30min。预保护时间过长可能会影响细胞活力，影响筛选和评价结果。

如未作特殊说明，本发明所述终浓度均是指物质加入到体系中后在总体系中的浓度。

（5）预保护完成后，加入阿霉素进行损伤；

作为优选，阿霉素的损伤浓度为0.3～0.6μM，损伤时间为6～24h。更优选的损伤浓度为0.3μM，损伤时间为24h，以模拟实际临床应用中阿霉素低剂量致慢性心肌毒性的过程。同时，适宜的损伤浓度和损伤时间可避免心肌细胞过度受损，影响筛选和评价结果。

（6）向损伤后的心肌细胞中同时加入具有不同激发和发射波长的细胞膜完整性荧光探针与细胞核荧光探针，进行荧光标记；