[发明专利]检测金黄色葡萄球菌的方法及其单抗

说明书

技术领域

本发明属于微生物检测领域。具体而言，本发明涉及一种检测金黄色葡萄球菌的方法、用于该方法的两株抗金黄色葡萄球菌单克隆抗体以及产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞。

背景技术

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是最常见的食源性致病菌，广泛存在于自然环境中。金黄色葡萄球菌主要污染奶、肉、蛋、鱼及其制品等动物性产品，包括奶制作的饮料、冷饮、糕点，熟肉、肉制品罐头，剩饭、油煎蛋、糯米糕、凉粉、剩大米和米酒等，俗名“嗜肉菌”。金黄色葡萄球菌侵染人体后主要会引起一下人体疾患，其一是侵袭性疾病如引起化脓性感染，如伤口化脓、蜂窝织炎，肺炎、脑膜炎、心包炎，败血症等；其二是由金黄色葡萄球菌产生的毒素性疾病，人食用后引起头晕、恶心、腹泻、呕吐等急性胃肠炎等食物中毒症状，而由毒素引起的休克综合症表现为高热、低血压、腹泻、皮疹、休克。

目前金黄色葡萄球菌的检测主要依赖于国标所规定的生化鉴定，其缺点是操作繁琐、检测周期较长，无法适应大量的样品筛查。免疫学检测是近年来出现的最快速、准确、稳定的快速检测手段，但是检测产品全部依赖进口，我国目前尚无拥有完全自主知识产权，且可运用于检测实践的快速检测产品，该专利以金黄色葡萄球菌为检测靶标，所要求保护的技术涉及金黄色葡萄球菌快速检测产品。

发明内容

本发明的目的是提供一种体外检测金黄色葡萄球菌的方法。

本发明的另一个目的是提供用于上述方法的两株由同一次单克隆抗体制备过程产生的可特异性地结合于金黄色葡萄球菌不同抗原位点的单克隆抗体。

本发明的另一个目的是提供产生上述单克隆抗体的杂交瘤细胞。

本发明的第一方面是提供了一种体外检测金黄色葡萄球菌的方法，包括以下步骤：

（a）将待测样品加样于包被有捕捉抗体的固相载体，从而使待测样品中的金黄色葡萄球菌与固相载体上的捕捉抗体结合，形成带有“金黄色葡萄球菌-捕捉抗体”二元复合物的固相载体；所述的捕捉抗体是特异性地结合于金黄色葡萄球菌的单克隆抗体5D6D9G3B4，所述的单克隆抗体5D6D9G3B4由小鼠杂交瘤细胞系5D6D9G3B4，CGMCC No.8764产生；

（b）将检测抗体加样于（a）获得的固相载体，从而形成带有“检测抗体-金黄色葡萄球菌-捕捉抗体”三元复合物的固相载体；所述的检测抗体是特异性地结合于金黄色葡萄球菌的单克隆抗体5D2G2D9C1，所述的单克隆抗体5D2G2D9C1由小鼠杂交瘤细胞系5D2G2D9C1，CGMCC No.8763产生，且所述的单克隆抗体5D2G2D9C1携带一可检测标记物；和

（c）检测三元复合物中的可检测标记物，从而确定待测样品中金黄色葡萄球菌的存在与否以及存在的量。

在一优选例中，所述的固相载体为酶标反应板。

在另一优选例中，所述的可检测标记物为辣根过氧化物酶。

本发明的第二方面是提供了一种免疫球蛋白，它是特异性地结合于金黄色葡萄球菌的单克隆抗体，它由小鼠杂交瘤细胞系5D6D9G3B4，CGMCC No.8764所产生。

本发明的第三方面是提供了一种产生上述单克隆抗体的杂交瘤细胞，它是小鼠杂交瘤细胞系5D6D9G3B4，CGMCC No.8764。

本发明的第四方面是提供了上述免疫球蛋白的用途，它被用于检测金黄色葡萄球菌。

本发明的第五方面是提供了一种免疫球蛋白，它是特异性地结合于金黄色葡萄球菌的单克隆抗体，它由小鼠杂交瘤细胞系5D2G2D9C1，CGMCC No.8763所产生。

本发明的第六方面是提供了一种产生上述单克隆抗体的杂交瘤细胞，它是小鼠杂交瘤细胞系5D2G2D9C1，CGMCC No.8763。

本发明还提供了上述免疫球蛋白的用途，它被用于检测金黄色葡萄球菌。

本发明各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本发明的特点、目的和优势将更为明显。

附图说明

图1本发明的单克隆抗体的SDS-PAGE电泳图

Lane1：5D2G2D9C1，Lane2：5D6D9G3B4

具体实施方式

单克隆抗体