[发明专利]一种老山芹愈伤组织诱导方法

说明书

技术领域

本发明涉及野生植物资源开发领域，尤其涉及一种老山芹愈伤组织诱导方法。

背景技术

随着社会生活水平的整体提高，“回归自然”、“呼唤绿色”已成为现代人生活的主题。山野菜因其独特的生长环境、纯天然、无污染、营养丰富、风味独特和兼具保健功能，其日益成为人们的消费取向。目前山野菜已成为风行世界的五类健康食品之一。在日本、西欧和东南亚等国山野菜被称为“天然野味”和“健康食品”。近年来国内外对山野菜的需求快速增长，出口量达到50万吨，并以每年20％的速度递增，因此山野菜的开发必将成为21世纪最具生命力的朝阳产业和绿色环保产业之一。

老山芹，即东北牛防风(Heracleum moellendorffii)，属伞形科，多年生草本植物，基生嫩叶可食用，是色、香、味俱佳的珍贵山野菜。它含有多种丰富的维生素A、B族维生素、维生素C、维生素E和钙、铁、锌等微量元素，此外它还含有苏氨酸、胱氨酸、精氨酸等16种氨基酸，人体必需氨基酸含量达到每100克新鲜老山芹中含968mg。老山芹不仅是天赐的野生家蔬，而且是一味可治疗多种疾病的良药，具有显著的降压、降血糖作用，有祛风除湿，止痛的功能，对癌症化疗后的康复具有显著的食疗效果，被为称山野菜中的“绿色黄金”。虽然老山芹具有很高的经济价值，但由于其野生自然繁殖率低，加之掠夺式过度采集而导致资源日趋枯竭；另外，老山芹种子休眠期较长，种子萌发率低，繁殖率低，人工育苗困难，技术要求高，很难被农民所掌握，因而，老山芹人工栽培产业发展缓慢，难以满足国内外市场对老山芹产品的需求。

鉴于上述缺陷，本发明创作者经过长时间的研究和实践终于获得了本创作。

发明内容

本发明的目的在于提供一种老山芹愈伤组织诱导方法，用以克服上述技术缺陷。

为实现上述目的，本发明提供一种老山芹愈伤组织诱导方法，该具体过程为：

步骤a，老山芹外植体制备和消毒：选取老山芹培养材料，在70％酒精中消毒10-30秒，用无菌水冲洗3-5次，每次5分钟，然后用0.1％HgCl₂溶液消毒3-7分钟，无菌水冲洗3-5次，每次5分钟，最后用无菌滤纸吸干材料表面的水分；

步骤b，老山芹愈伤组织诱导：将上述步骤a中处理好的老山芹培养材料分割，接入诱导愈伤组织培养基中诱导愈伤；

该诱导愈伤组织培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料制成：蔗糖20-40g，琼脂粉5.5-8.5g，2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)0.25-2.0mg，6-(苄胺基)嘌呤(6-BA)0.25-2.0mg；调节培养基pH；

将配制好的培养基分装在培养瓶中，每瓶30毫升，盖好瓶盖，在压力为0.1-0.15MPa下灭菌25分钟，将培养瓶置于温度为24-26℃、暗培养2天，然后在光照强度为2000-3000lx下，每天光照12-16小时，培养15-20天。

进一步，在上述步骤a中，所述老山芹培养材料包括叶片或叶柄，将叶片或叶柄作为外植体；在上述步骤b中，叶片切成0.5×0.5-1.0cm²的材料块，老山芹叶柄切成0.5-1.0cm长的切段。

进一步，在上述步骤b中，调节培养基pH为5.21-5.81。

与现有技术相比较本发明的有益效果在于：本发明生产方法简单，成本低；愈伤组织诱导率高，愈伤组织质量高；为今后开展老山芹组培工厂化高效繁育技术研究奠定重要的基础，同时也可为老山芹的细胞诱变育种和原生质体融合育种技术的建立奠定重要的理论和技术基础。

具体实施方式

以下，对本发明上述的和另外的技术特征和优点作更详细的说明。

本发明老山芹愈伤组织诱导方法，包括下述步骤：

步骤a，老山芹外植体制备和消毒：老山芹叶片或叶柄作为外植体，在70％酒精中消毒10-30秒，用无菌水冲洗3-5次，每次5分钟，然后用0.1％HgCl₂溶液消毒3-7分钟，无菌水冲洗3-5次，每次5分钟，最后用无菌滤纸吸干材料表面的水分。

步骤b，老山芹愈伤组织诱导：将上述步骤a中处理好的老山芹叶片切成0.5×0.5-1.0cm²的材料块，老山芹叶柄切成0.5-1.0cm长的切段，接入诱导愈伤组织培养基中诱导愈伤。